基因工程的基本操作程序1．掌握目的基因获取的常见方法。(难点) 2.学会基因表达载体构建的方法和要求。(重、难点) 3．理解目的基因导入受体细胞的具体过程。(重点) 4.掌握目的基因检测与鉴定的具体操作。一、目的基因的获取(阅读教材 P8～P11).目的基因：主要是指编码蛋白质的基因，也可以是一些具有调控作用的因子。.目的基因的获取方法(1)从基因文库中获取① 基因文库：将含有某种生物不同基因的许多 DNA 片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，称为基因文库。② 种类③ 提取依据：基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色体上的位置、基因的转录产物 mRNA，以及基因的表达产物蛋白质等特性。(2)利用 PCR 技术扩增目的基因①PCR 的含义：是一项在生物体外复制特定 DNA 片段 的核酸合成技术。② 目的：短时间内大量扩增目的基因。③ 原理：DNA 双链复制 。④ 过程第一步：加热至 90～95 ℃，DNA 解链 ；第二步：冷却至 55～60 ℃，引物结合到互补 DNA 链；第三步：加热至 70～75 ℃，热稳定 DNA 聚合酶 (Taq 酶)从引物起始进行互补链的合成。如此重复循环多次。⑤ 特点：指数形式扩增。(3)人工合成如果目的基因较小，核苷酸序列又已知，可通过 DNA 合成仪用化学方法人工合成。二、基因表达载体的构建(阅读教材 P11)1．构建基因表达载体的目的(1)使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代。(2)使目的基因能够表达和发挥作用。2．基因表达载体的组成基因表达载体的组成两子启动和终止；目的基因在中间；标记基因来筛选。3．基因表达载体的功能：通过基因表达载体将目的基因导入受体细胞。三、将目的基因导入受体细胞(阅读教材 P11～P13).转化的概念：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。.将目的基因导入植物细胞(1)农杆菌转化法：将目的基因导入双子叶植物和裸子植物。(2)基因枪法：将目的基因导入单子叶植物常用的方法。(3)花粉管通道法：我国科学家独创的一种方法。将目的基因导入动物细胞(1)方法：显微注射法。(2)常用受体细胞：受精卵。4．将目的基因导入微生物细胞(1)方法① 用 Ca 2 ＋ 处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中 DNA 分子的生理状态(这种细胞称为感受态细胞)。② 感受态细胞吸收重组表达载体 DNA 分子 。(2)受体细胞：原核细胞(使用最广泛的是大肠杆菌细胞)。(3)原核生物的特点：繁殖快、...
