第 2 课时 基因工程的基本操作程序[目标导读] 1.结合教材 P8图 1—6，整体把握并说出基因工程的原理和基本操作程序。2.尝试设计某一转基因生物(例如让大肠杆菌生产鼠的 β珠蛋白)的研制过程。[重难点击] 基因工程基本操作程序的四个步骤。1．质粒作为载体所具备的条件(1)能自我复制：能够在受体细胞中进行自我复制，或整合到染色体 DNA 上，随染色体 DNA 进行同步复制。(2)有切割位点：有一个至多个限制酶切割位点，供外源基因插入。(3)具有标记基因：具有特殊的标记基因，供重组 DNA 的鉴定和选择。(4)无毒害作用：对受体细胞无毒害作用，否则受体细胞将受到损伤甚至死亡。2．DNA 的复制过程示意图DNA 复制是一个边解旋边复制的过程，以解开的每一段母链为模板，在 DNA 聚合酶 等酶的作用下，利用细胞内游离的四种脱氧核苷酸为原料，按照碱基互补配对原则，各自合成与母链互补的一段子链，复制结束后，一个 DNA 分子就形成了两个完全相同的 DNA 分子。3．基因的表达是指某一基因通过转录、翻译合成相关蛋白质的过程。[课堂导入] 抗软化番茄是通过将抗多聚半乳糖醛酸酶基因导入番茄细胞培育而成的，具有抗软化、耐储存的优点，这种技术需要特定的操作程序，今天我们就来学习基因工程的基本操作程序。探究点一 目的基因的获取1．目的基因：主要是指编码蛋白质的基因。2．获取目的基因的常用方法1(1)从基因文库中获取① 基因文库：将含有某种生物不同基因的许多 DNA 片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因。② 基因文库种类文库类型部分基因文库(如 cDNA 文库)基因组文库文库大小小大基因中启动子(具有启动作用的DNA 片段)无有基因中内含子(位于编码蛋白质序列内的非编码 DNA 片段)无有基因多少某种生物的部分基因某种生物的全部基因物种间的基因交流可以部分基因可以(2)利用 PCR 技术扩增目的基因① 原理：DNA 双链复制 。② 过程：2a．变性：加热至 90～95 ℃，使 DNA 中的氢键断裂，双链解开。b．复性：冷却至 55～60 ℃，引物与单链相应互补序列结合。c．延伸：加热至 70～75 ℃，在 DNA 聚合 酶的作用下，沿模板延伸子链，最终合成 2 条 DNA 分子。③ 若 PCR 过程中，扩增循环的次数是 n，则目的基因的量将被扩增 2n 倍。④PCR 技术中因为需要在高温下进行，因此需要特殊的热稳定 DNA 聚合 酶(Taq 酶)。(3)人工合成法：如果基因比较小，核...
