基因工程的基本操作程序教材拓展拓展点一 标记基因和标记基因的作用课本上提到运载体要有标记基因，其作用是供重组 DNA 鉴定和筛选，那么怎样利用标记基因进行鉴定和筛选呢？请同学们阅读下面一段文字：运载体中所携带的一些抗性基因（如氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因）及发光基因等，能控制一些特殊物质的合成，利用这些特殊物质可以筛选运载体或重组运载体，这些基因就叫做标志基因。在用限制酶切割目的基因和运载体、表达载体构建及将目的基因导入受体细胞，这一系列过程都是在人为控制条件下，在有关酶的作用下自行完成的，而不是人为条件下一个一个处理的，是很多对象同时进行的，这样，就会出现有的运载体被限制酶切割开，有的运载体没有被限制酶切割开，没有被限制酶切割开的运载体，就不可能连接上目的基因，只有被限制酶切开的运载体才有可能拼接上目的基因。我们就必须选择出连接上目的基因的重组运载体（即表达载体），然后进行扩增，得到大量的表达载体。然后把大量的表达载体和大量的受体细胞放在一起，在一定的人为条件下，让其自行导入受体细胞，这样，在导入受体细胞时，就会出现有的受体细胞被导入了表达载体，有的细胞没有导入表达载体，我们再选出含有表达载体的受体细胞，进行扩增，培养。在上述过程中要进行两步筛选，一是筛选含有运载体的受体细胞，其过程是在含有相应抗菌素的培养基上培养，只有获得运载体的受体细胞才能继续生长，这样便可筛选出含有运载体的受体细胞。二是筛选含有目的基因的受体细胞，其过程是从每个菌落取一部分再接种到含另一种抗生素的培养基上培养，由于目的基因插入该标记基因中，致使该基因不能表达，因而受体细胞不能在含该抗生素的培养基上生存，据此可以从该菌落剩余部分的菌体中筛选出含目的基因的受体细胞。注意：在基因操作的基本步骤中要进行多次筛选。拓展点二 从基因文库中找到所需要的基因从基因文库中找到目的基因是一件比较复杂的事情，要根据目的基因已有的某些信息来进行。下面介绍一种根据基因的部分核苷酸序列找到目的基因的方法。第一步，通过 PCR 方法将目的基因已知的部分核苷酸序列扩增出来，进行放射性同位素标记（也可以用别的标记方法进行，如生物素、荧光素等），即用标记了放射性同位素的目的 DNA 片段作为探针，与扩增出来的 DNA 杂交。第二步，将基因文库中的所有菌落转移至硝酸纤维膜上（也可以用其他类型的膜），然后通过处理溶解消化掉细菌中的蛋...
