DNARNA合成常见问题解答VIP免费

DNA/RNA合成常见问题解答处理和保存1.如何保存寡核苷酸?2.如何重悬寡核苷酸?3.如果寡核苷酸在室温中放置超过一星期，还可以使用吗?4.荧光染料标记的寡核苷酸，在储存和使用过程中必须特殊处理吗?纯化和浓缩5.如何定量合成的寡核苷酸?6.如何通过紫外吸光度值来定量寡核苷酸?7.如一个18个碱基的寡核苷酸包括3个dG,4个dC,5个dA和6个dT,OD值是0.7，那么它的量是多少?8.如何计算寡核苷酸的分子量?9.如何测定寡核苷酸的质量?10.如何测定寡核苷酸的质量?11.如何测定合成的寡核苷酸的Tm值?12.为什么Bioneer提供的Tm值和我们的Tm值不同?13.用什么方法调整寡核苷酸的浓度?14.单位换算表合成与订购15.如何合成寡核苷酸?16.标准寡核苷酸结构17.Bioneer能合成的最长的寡核苷酸是多长?18.当我预订50nmol的寡核苷酸，产品却不足50nmol，为什么?19.能合成出高百分比“G”的寡核苷酸吗?20.能提供寡核糖核酸(RNA)合成吗?21.合成的寡核苷酸在3'或5'位有磷酸基吗?22.简并引物及通用引物是什么?纯化方法23.怎样纯化合成的寡核苷酸?24.用于芯片分析的60mer寡核苷酸如何被纯化呢?修饰寡核苷酸25.修饰寡核苷酸26.作为反义脱氧寡核苷酸的硫磷酰化寡核苷酸实验27.怎样制备双链DNA?Q1.如何保存寡核苷酸？↑TOP通常，寡核苷酸应该-20℃保存，该温度下能稳定保存一年以上。寡核苷酸在溶液中较为稳定，但易被污染的核酸酶降解，因此我们建议应干燥储存。若要以溶液形式储存，最好将其分装在几管中分别保存，反复冻融会使寡核苷酸降解。另外，酸性条件下，DNA会因为脱嘌呤作用而降解；碱性条件会使磷酸二酯键水解断裂。Q2.如何重悬寡核苷酸？↑TOP为便于长期保存，我们建议使用TE缓冲液(10mMTris-HCl,1mMEDTA,pH8.0)，而不用无菌水来溶解寡核苷酸。重悬后，寡核苷酸应该在-20癈保存以长期使用。寡核苷酸在无菌水中很难溶解，加一定量的NaOH有助于寡核苷酸在水中溶解。Q3.如果寡核苷酸在室温中放置超过一星期，还可以使用吗？↑TOP脱水的寡核苷酸是长期稳定的。即使在溶液状态寡核苷酸也相当稳定，通常情况(没有引入使寡核苷酸降解的污染物)即使在室温中放置超过一星期也能使用。Q4.荧光染料标记的寡核苷酸，在储存和使用过程中必须特殊处理吗？↑TOP如果暴露在光线下，荧光染料标记的寡核苷酸比未标记的寡核苷酸更易降解，荧光强度会逐渐降低。为了保持其荧光效能，荧光染料标记的核苷酸应避光-20℃保存。由于Cy3和Cy5在pH大于9时易被降解，所以Cy3和Cy5修饰Q5.如何定量合成的寡核苷酸?↑TOP合成的寡核苷酸的量非常少，不能直接称重来定量。通常通过测量紫外吸光度值(OD值)来定量。Q6.如何通过紫外吸光度值来定量寡核苷酸？↑TOP寡核苷酸的量经常用OD值来描述。1个OD值是体积1ml寡核苷酸溶液，在内径1cm的比色杯中的吸光度值，约为33mg寡核苷酸，序列不同的寡核苷酸OD值有所不同。因为在260nm处单个碱基的吸光度值是已知的，所以序列已知的寡核苷酸的浓度就可以测定。dT:8.8ml/µmoldG:11.7ml/µmoldC:7.3ml/µmoldA:15.4ml/µmol对于一段寡核苷酸，它的吸光度等于每个碱基的数目乘以它的吸光系数，然后将4种碱基的结果加起来就是整个寡核苷酸的吸光度。它的浓度可通过下式来计算：O.D.=εC(内径1cm的比色杯)Q7.如一个18个碱基的寡核苷酸包括3个dG,4个dC,5个dA和6个dT,OD值是0.7，那么它的量是多少？↑TOP首先，用下面公式计算18个碱基的寡核苷酸的吸光度是多少：ε=11.7×3+7.3×4+15.4×5+8.8×6=194.1(ml/mmole)然后，通过下式来计算寡核苷酸的浓度：O.D.=εC，C=O.D./εCC=0.7/194.1=0.0036(µmol/ml)=3.6(nmol/ml)最后，OD值为0.7的18个碱基寡核苷酸的浓度是3.6nmol。Q8.如何计算寡核苷酸的分子量?↑TOP寡核苷酸的分子量可以通过下式进行计算：M.W.=(NA×249.2)+(NC×225.2)+(NG×265.2)+(NT×240.2)+(寡核苷酸长度-1)×63.98+2.02NA=总A数NC=总C数NG=总G数NT=总T数Q9.如何测定寡核苷酸的质量?↑TOP通常，合成的寡核苷酸的质量用摩尔数来描述，常用nmol。用寡核苷酸的摩尔数或寡核苷酸的分子量可以计算寡核苷酸的量：寡核苷酸质量(ng)=分子量(M.W.)×摩尔数(nmol)Q10.如果不知道寡核苷酸的碱基组成，有什么办...