第1页共31页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第1页共31页时间分辨技术的原理目前最先进的免疫检测技术：1、时间分辨原理：用三价稀土离子及其鳌合剂作为示踪物，代替荧光物质、同位素或酶，标记蛋白质、多胎、激素、抗体、核酸探针或生物流行性细胞，当反应体系发生后，用时间分辨仪器测定最后产物中荧光强度。根据荧光强度或相对荧光强度比值，来判断反应体系中分析物的浓度，达到定量分析之目的。2、时间分辨原子标记物的特点：发射光和激发光有较大的STOKES位移——高特异性长寿命荧光，降低其他物质的荧光干扰——高灵敏度半衰期长达几十万年，试剂受干扰小——高稳定性原子标记与大分子标记物的对比原子标记物大分子标记物标记位点多个,可达20个只有1个对被标记物蛋白活性的影响影响小,基本无影响影响大,经常影响蛋白活性对被标记物空间结构的影响无影响,保证稳定性影响大,造成试剂的不稳定受环境因素的影响影响小影响大,温度影响3、波长分辨：标记离子的荧光激发光波长范围较宽，发射光光谱范围较窄，是类线光谱，有利于降低本底荧光强度，提高分辨率。激发与发射光之间有一个较大的STOKES位移，有利于排除非特异荧光的干扰，增强测量的特异性。第2页共31页第1页共31页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第2页共31页4、时间分辨：标记离子螯合物产生的荧光强度高，寿命长，有利于消除样品及环境中荧光物质对检测结果的影响。每一秒名检测样品1000次，取其中不受干扰的400次的均值作为测定值，有利于提高检测的准确性。时间分辨技术取代酶免、放免是免疫检测技术发展的必然趋势！RIA（放免）放射性（125I），对环境和身体的危害，已经为重视环保的国家逐步取消，如整个欧洲仅尚存几个放免试验室。125I半衰期短，导致试剂的有效期短，需每次定标，造成很大的浪费。由于标记物（125I）的不断变化，带来药盒批间、批内较大的变异，标准曲线无法保存备用。ELESA（酶免）灵敏度、重复性不及放免，易造成漏检和假阳性。酶的纯度和反应过程容易受环境因素影响，导致稳定性、重复性不好。与其它技术的相对优势：（1）、是现有的免疫检测方法中灵敏度最高的（2）、是现有的免疫检测方法中稳定性最好的（3）、多标记检测是目前所有免疫检测技术中独一无二的第3页共31页第2页共31页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第3页共31页TRF技术与电化学发光的比较时间分辨荧光电化学发光标记物四种原子:Eu,Sm,Te,Dy一种原子:钌多标记技术有无科研项目能(1000多种科研项目)无试剂种类58种临床,24种科研,共82种40种临床,无科研试剂价格低高TRF与化学发光的比较时间分辨荧光化学发光发光效率95%1%重复检测可无数次重复不可重复本底噪声零本底干扰大灵敏级数10-1910-15标记物原子大分子化合物标记位点每个抗体可达20个1个标准曲线稳定达一年以上稳定2到4周多标记有,最多可达四标记无科研开发有无第4页共31页第3页共31页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第4页共31页时间分辨荧光免疫定量分析简介时间分辨荧光分析（TimeresolvedFluoroimmunoassay,TRFIA）是一种非同位素免疫分析技术，它用镧系元素标记抗原或抗体，根据镧系元素螯合物的发光特点，用时间分辨技术测量荧光，同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨，可有效地排除非异荧光的干扰，极大地提高了分析灵敏度。解离增强镧元素荧光免疫分析是时间分辨荧光免疫分析中的一种。它用具有双功能基团结构的螯合剂，使其一端与铕（Eu）连接，另一端与抗体/抗原分子上的自由氨基连接，形成EU标记的抗体/抗原，经过免疫反应之后生成免疫复合物。由于这种复合物在水中的荧光强度非常弱，因此加入一种增强剂，使Eu3+从复合物上解离下来，自由Eu3+同增强剂中的另一种螯合剂螯形成一种胶态分子团，这种分子团在紫外光的激发下能发出很强的荧光，信号增强了百万倍。因为这种分析方法使用了解离增强步骤，因此称为解离增强镧系元素荧光免疫分析。乙肝病毒（HBV）标记物的检测方法常用测定乙肝病毒的抗原、抗体...
