发酵工艺综合实习指导书-内容VIP免费

目录综合实验一土壤中稀有放线菌的分离和纯化及抗生菌的体外抗菌鉴定综合实验二玉米淀粉液化、糖化及酒精发酵综合实验三甜酒的酿造综合实验一土壤中稀有放线菌的分离和纯化及抗生菌的体外抗菌鉴定一土壤中稀有放线菌的分离和纯化1实验目的了解采集土样的要求和方法，掌握由土壤中分离稀有放线菌的基本原理和操作技术，学习并掌握土壤稀释法和微生物的纯培养技术。2实验原理筛选放线菌是新抗研究的重要课题之一。迄今为止，已发现的抗生素有80%皆来自于放线菌。放线菌主要存在于土壤中，并在土壤中占有相当大的比例。一般地，放线菌在比较干燥、偏碱性、含有机质丰富的土壤中数量居多。通常，随着地理分布、植被及土壤性质的不同，放线菌的种类、数量和拮抗性也各不相同。土壤是微生物的大本营，其中的放线菌多以链霉菌为主，因此人们通常将除链霉菌以外的其它放线菌统称为稀有放线菌。若以常规方法进行分离，得到的几乎全部是链霉菌。然而，当采用加热处理土样、选用特殊培养基或添加某种抗生素等方法时，均可提高稀有放线菌的获得率。由土壤中分离放线菌的方法很多，其中包括稀释法、弹土法、混土法和喷土法等，本实验主要采用稀释法，并通过选用特殊培养基的方法，来获得少量稀有放线菌。3仪器和材料（1）培养基：葡萄糖天门冬素琼脂，精氨酸琼脂，高氏1号琼脂，以上每种培养基皆用500ml三角瓶分装250ml。（2）灭菌物品：牛皮纸袋，培养皿，1ml、5ml吸管，250ml三角瓶分装90ml无菌水（含30粒玻璃珠），18×180mm试管分装9ml无菌水，牙签，玻璃刮铲，18×180mm试管中分装10ml1‰K2Cr2O7母液。（3）其它：采土铲，细目筛，药勺，称量纸，试管架，小天平，记号笔。4试验步骤（1）采土：选择适宜采样地点。用采土铲去除表土，取5～10cm深处的土壤约150g左右，装入无菌牛皮纸袋中，并注明采样日期、地点、土壤类型、植被和采样人姓名等。（2）土样预处理：新鲜土样应适当风干，并喷施小剂量杀虫剂以防培养过程中虫卵发育的影响。（3）制备平板：每组取10套无菌培养皿，将冷却至50℃左右的各培养基，分别倒入平皿，每皿约15～20ml。每种培养基中需加入20ppm的K2Cr2O7溶液。在皿盖上注明培养基种类及组号。（4）制备土壤稀释液：每组称取10g土样，放入90ml无菌水中，得到土壤原液。手摇15～20min后，静置1min。再用无菌吸管取1ml上清液，置于9ml无菌水中，充分混匀则得到10－2稀释液。依此类推，制备10－3、10－4稀释液（一般地，较肥的土壤使用10－3～10－5稀释液，而瘦土则使用10－2～10－4稀释液）。（5）铺平板：用1ml无菌吸管分别取0.1ml10－3～10－5稀释液，置于培养基平板中央。然后，再用无菌的玻璃刮铲均匀涂布，静置10min。每1稀释度3个重复，每1种培养基10套平板。并注明各稀释度。（6）培养及观察：将各平板置于28℃恒温箱中倒置培养14天。要求分别在第2天、7天和14天进行观察，并根据菌落大小、气生菌丝有无、气生菌丝和基质菌丝的颜色及可溶性色素有无等培养特征，选择单菌落放线菌进行纯培养，同时在平板背面的相应位置上作好标记。（7）纯培养：及时将选定的单菌落接入高氏1号琼脂斜面，每个菌株接1支斜面。必要时，中间可加1次划线分离培养，然后再转斜面。5结果与讨论将实验结果填入下表。思考题1、在分离土壤放线菌时为什么要选用多种培养基？2、在培养基中添加K2Cr2O7有何作用？二抗生菌的体外鉴别1实验目的了解抗生素产生菌体外筛选法的原理，学习并掌握抗生菌的鉴别方法。2实验原理由土壤中分出的放线菌需进一步鉴别是否为需要的抗生菌。首先应根据筛选目的确定试验模型，然后利用培养基平板进行拮抗性测定。常用的方法有琼脂块法和滤纸片法。其主要依据是扩散原理，即观察在抗生菌周围是否会出现明显的抑菌圈。抑菌圈的大小和透明度则表明了该菌株抗菌活性的强弱。本实验选用了这两种方法。3仪器与材料（1）培养基：500ml三角瓶中分装300ml黄豆饼粉琼脂，18×180mm试管分装4ml黄豆饼粉浸汁，300ml三角瓶分装150ml细菌培养基，150ml三角瓶分装50ml马铃薯培养基。（2）试验菌：枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）大肠杆菌（Escherichiacoli）金黄色葡萄球菌（Staphl...