专题17生物技术实践1．枯草芽孢杆菌菌体可合成淀粉酶等消化酶，在消化道中与动物体内的消化酶类一同发挥作用，但在紫外线照射下可获得不能合成淀粉酶的突变体。研究发现紫外线处理时间过短，获得突变体不足，若紫外线处理时间过长，又会导致枯草芽孢杆菌大量死亡。为探究紫外线处理最佳时间，需测定经处理后的枯草芽孢杆菌的突变率和存活率。完成相关实验步骤：（1）从临时保存菌种的______________培养基中挑取菌体，制成适宜浓度稀释菌液，用稀释涂布平板法或_______________________方法测定枯草芽孢杆菌的密度；（2）将上述稀释菌液____________________________________,分别用同等强度的紫外线灯在相同条件下处理A组1分钟、B组3分钟、C组5分钟；（3）将每组处理后的菌液稀释适宜倍数，吸取一定量的菌液涂布在_______________的选择培养基上，每组菌液需要涂布________个平板，同时另取等量相应浓度菌液涂布在相应的1个牛肉膏蛋白胨培养基上，将上述平板均放置于37℃恒温培养箱中培养48小时；（4）计算每个平板上菌落数。牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数可用于计算_________；其与选择培养基上的菌落数的差值可用于计算____________。（选填“突变率”或“存活率”）【答案】斜面显微镜直接计数法均分为3组并标记A、B、C以淀粉为唯一碳源3个（或2-3个）存活率突变率【解析】（1）从临时保存菌种的斜面培养基中挑取菌体，制备成菌液，用稀释涂布平板法或显微镜直接计数（或抽样检测）方法测定枯草芽孢杆菌的浓度；（2）将菌液均分为三组，（标记为A、B、C），分别用相同强度的紫外灯处理1min、3min、5min；（3）将每组处理后的菌液稀释适宜倍数，部分涂布在1个以淀粉为唯一碳源的培养基上，等量菌液涂布在1个牛肉膏蛋白胨培养基上。37℃培养48h。（4）计数每个平板上的菌落数。牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数可用于计算存活率，其与另一种培养基上的菌落数可用于计算突变率。2．针对蔬菜废弃物纤维素降解慢的难题，从自然界中采集堆肥、枯树叶等样品进行分离，筛选分解能力较强的纤维素分解菌。某研究小组探究了温度对纤维素分解菌分解能力的影响，实验步骤如下：①纤维素分解菌的筛选、分离及纯化→②纤维素分解菌菌株数量的测定→③纤维素酶活力测定和降解滤纸能力的检测。请回答下列问题：（1）步骤①中，用________法将1mL菌液逐步稀释成10-6的悬浊液。为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基（成分见下表）：酵母膏无机盐淀粉纤维素粉琼脂CR溶液水培养基甲++++-++培养基乙+++-+++注："+"表示有，"-"表示无。据表判断，培养基甲_____（填"能"或"不能"）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是________；培养基乙________（填"能"或"不能"）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是____________。某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是____。（2）对土壤中该类微生物进行计数，则步骤①采用的接种方法是______________。（3）纤维素酶的测定方法，一般是采用对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的________进行定量测定的方法。【答案】梯度稀释不能液体培养基不能分离单菌落且纤维素不是唯一碳源不能培养基乙中没有纤维素，不会形成CR-纤维素红色复合物，即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌菌液浓度过高（土壤溶液稀释不够）稀释涂布平板法葡萄糖【解析】步骤①中，若用稀释涂布平扳法接种，则必须将菌液进行一系列的梯度稀释。（2）分析表格可知，培养基甲为液体培养基且纤维素不是唯一碳源，不能用于分离和鉴别纤维素分解菌，纤维素分解菌鉴别培养基属于固体培养基；培养基乙没有纤维素，不会形成CR-纤维素红色复合物，即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌，因此也不能用于分离和鉴别纤维素分解菌。某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是菌液浓度过高（土壤溶液稀释不够），为避免此种现象，应对菌液进行梯度稀释（加大稀释倍数）。（3）稀释涂布平板法不仅能实现微生物的分离，还能用于微生物的计数。（4）为了确定是纤维素分解菌，还需要进行发酵...
