分解纤维素的微生物的分离分解纤维素的微生物的分离课题重难点:从土壤中分离分解纤维素的微生物㈠㈠纤维素与纤维素酶纤维素与纤维素酶1.1.纤维纤维素素纤维素是一种由纤维素是一种由葡萄糖葡萄糖首尾相连而成首尾相连而成的的高分子高分子化合物,是含量最丰富的化合物,是含量最丰富的多糖多糖类物质。类物质。一、基础知识土壤中某些微生物能够分解利用纤维素,土壤中某些微生物能够分解利用纤维素,原因是能产生原因是能产生纤维素酶2.2.纤维素酶纤维素酶C1酶、Cx酶葡萄糖苷酶纤维素纤维素酶是一种纤维素酶是一种复合酶复合酶,一般认为它,一般认为它至少包括至少包括三种组分三种组分,即,即CC11酶、酶、CCXX酶和葡萄糖苷酶酶和葡萄糖苷酶纤维二糖葡萄糖练一练:1.下列关于纤维素酶的说法,错误的是A.纤维素酶是一种复合酶,至少包括三种B.纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖C.纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁D.葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖①取二支20mL的试管实验:纤维素酶分解纤维素的实验②各加入一张滤纸条③各加入pH4.8,物质量为0.1mol/L的醋酸-醋酸钠缓冲液11ml和10ml甲乙④在乙试管中加入1mL纤维素酶⑤两支试管固定在锥形瓶中,放在140r/min的摇床上振荡1h⑥结果:乙试管的滤纸条消失1、筛选纤维素分解菌的方法______________。该方法可以通过________反应直接筛选。刚果红染色法颜色2、其原理是:刚果红可以与纤维素形成____________,当纤维素被_________分解后,红色复合物无法形成,出现以_____________为中心的________,可以通过___________________________来筛选纤维素分解菌。红色复合物纤维素酶纤维素分解菌透明圈是否产生透明圈(二)纤维素分解菌的筛选2.利用刚果红法可以筛选出纤维素分解菌,下列说法错误的是A.刚果红能与纤维素形成红色复合物B.刚果红能与纤维二糖形成红色复合物C.刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物D.若培养基上产生了透明圈,则说明已筛选出了纤维素分解菌(三)、实验设计土壤取样选择培养梯度稀释将样品涂布到鉴别培养基挑选菌落什么样的环境取样?①培养的目的?②选择培养基的特点?挑选什么样的菌落?①鉴别培养基的特点?②如何鉴别?①①分布环境分布环境11、土壤取样:、土壤取样:富含纤维素的环境中富含纤维素的环境中操作步骤操作步骤生物与环境的互相依存关系,在富含纤维素的环境中纤维素分解菌的含量相对提高②②原因原因③③实例:树林中多年落叶形成的腐殖土,多年实例:树林中多年落叶形成的腐殖土,多年积累的枯枝败叶等。积累的枯枝败叶等。④④如果找不到合适的环境,可以将滤纸埋在土壤如果找不到合适的环境,可以将滤纸埋在土壤中,将滤纸埋在土壤中有什么作用?中,将滤纸埋在土壤中有什么作用?将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对集中,实际上是人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境。一般应将滤纸埋于深约10cm左右的土壤中。22、选择培养、选择培养增加纤维素分解菌的浓度增加纤维素分解菌的浓度,以确保能够从,以确保能够从样品中分离所需要的微生物。样品中分离所需要的微生物。①①目的:目的:②②制备选择培养基:制备选择培养基:培养基成分分析培养基组成提供主要的营养物质纤维素粉5g碳源NaNO31g氮源、无机盐KCl0.5gNa2HPO4·7H2O1.2gKH2PO40.9gMgSO4·7H2O0.5g无机盐酵母膏0.5g生长因子、碳源、氮源水解酵素0.5g氮素、生长因子溶解后,蒸馏水定容至1000mL水提示:自变量为培养基的种类,即普通培养基和选择培养基。可用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照,或者将纤维素改为葡萄糖。AA、旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基?为什么?、旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基?为什么?是液体培养基,原因是配方中无凝固剂(琼脂)是液体培养基,原因是配方中无凝固剂(琼脂)BB、这个培养基对微生物是否具有选择作用?如果具有,、这个培养基对微生物是否具有选择作用?如果具有,是如何进行选择的?是如何进行选择的?有选择作用,本配方中纤维素作为主要碳源,只有能分解纤维素的微生物可以大量繁殖。CC、你能否设计一个对照实验,说明选择培养基的作用、你能否设计一个对照实验,说明选择培养基...