第2课时将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定[学习目标]1.熟悉目的基因导入受体细胞的方法。2.了解农杆菌转化法。3.画出DNA分子杂交示意图。4.目的基因的检测方法的比较。知识点一将目的基因导入受体细胞知识梳理1.转化的含义：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内□维持稳定和表达的过程。2．将目的基因导入植物细胞(1)□农杆菌转化法：将目的基因导入□双子叶植物和裸子植物最常用的方法①农杆菌特点：当植物体受到损伤时，伤口处的细胞会分泌大量的□酚类化合物，吸引农杆菌移向这些细胞，这时农杆菌中的□Ti质料上的T－DNA(可转移的DNA)可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的□DNA上。②受体细胞：植物□体细胞或受精卵。③操作过程：将目的基因插入到□Ti质粒的TDNA上―→转入□农杆菌―→导入□植物细胞―→目的基因整合到□受体细胞染色体的DNA上―→目的基因表达。(2)基因枪法：适用于□单子叶植物，成本较高。是利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的□表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并□表达的方法。(3)花粉管通道法：我国科学家独创的方法花粉管通道法，就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去□柱头；然后，滴加□DNA(含目的基因)，使目的基因借助□花粉管通道进入受体细胞。该方法十分简单经济。我国的转基因抗虫棉就是用此种方法获得的。3．将目的基因导入动物细胞(1)方法：□显微注射技术，采用最多、最有效的方法。(2)受体细胞：动物的□受精卵。(3)操作过程：将含有□目的基因的表达载体提纯―→取卵(□受精卵)―→□显微注射―→受精卵经胚胎早期培养后，□移植到雌性动物的□输卵管或子宫内―→获得□新性状的动物。4．将目的基因导入微生物细胞(1)方法①用□Ca2＋处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态(这种细胞称为□感受态细胞)。②将重组表达载体DNA分子溶于□缓冲液中与感受态细胞混合，在一定温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程。(2)受体细胞：原核生物(使用最广泛的是大肠杆菌)。(3)原核生物的特点：繁殖快、多为单细胞、□遗传物质相对较少等。植物基因工程常用的受体细胞为什么是体细胞，而动物基因工程一般只用受精卵？提示：植物体细胞的全能性较高，可经植物组织培养过程形成完整植物体，因此受体细胞可以是体细胞；动物体细胞的全能性受到严格限制，因此动物基因工程中的受体细胞一般只用受精卵。典题分析题型一农杆菌转化法的辨析[例1]农杆菌是一种在土壤中生活的微生物，能在自然条件下感染植物，因而在植物基因工程中得到了广泛的运用。如图为农杆菌转化法的示意图，试回答下列问题：(1)一般情况下农杆菌不能感染的植物是____________，利用农杆菌自然条件下感染植物的特点，能实现____________________。具体原理是在农杆菌的Ti质粒上存在TDNA片段，它具有可转移至受体细胞并整合到受体细胞____________上的特点，因此只要将携带外源基因的DNA片段插入到____________(部位)即可。(2)根据TDNA这一转移特点，推测该DNA片段上可能含有控制______________________(酶)合成的基因。(3)图示c过程中，能促进农杆菌向植物细胞转移的物质是________类化合物。(4)植物基因工程中除了农杆菌转化法之外，还可采取__________________________。(至少写出两种)解题分析(1)一般农杆菌不能感染的植物是单子叶植物，可感染双子叶植物和裸子植物。利用其感染植物的特点，可实现将目的基因导入植物细胞。可转移至受体细胞并整合到受体细胞染色体的DNA上的是农杆菌的Ti质粒上的TDNA片段，因此目的基因必须插入到该部位才能成功。(2)根据TDNA这一转移特点，可以推测该DNA片段能控制合成DNA连接酶、限制酶以实现与双子叶植物和裸子植物细胞染色体DNA的整合。(3)植物细胞受伤后可产生酚类化合物，促进农杆菌向植物细胞转移。(4)植物基因工程中除了农杆菌转化法之外，还有基因枪法和花粉管通道法等。答案(1)单子叶植物将目的基因导入植物细胞染色体的DNATDNA片段(内部)(2)DNA连接酶、限制酶(3)酚(4)基因枪法、花粉管通道法题后归纳农杆菌转化法中有两次拼接和两次导...
