条斑紫菜(Pyropia yezoensis)10个选育系的ISSR分析VIP免费

条斑紫菜（Pyropiayezoensis）10个选育系的ISSR分析摘要：利用issr分子标记进行条斑紫菜（pyropiayezoensis）10个选育品系的种质鉴定研究。结果表明，具条带特异性且表达稳定清晰的issr引物共14个，其扩增多态性片段约占97.1%，这些引物可用作区分这些品系的分子标记，同时利用引物826扩增的特异性位点建立了这些选育品系的issr遗传识别码。关键词：条斑紫菜；内部简单序列重复；种质鉴定中图分类号：q945文献标识码：adoi编码：10.3969/j.issn.1006—6500.2012.05.005issranalysisoftenbreedinglinesofpyropiayezoensischenshu—yin，luqin—qin，zhangmei—ru，huchuan—ming，xuguang—ping（marinefisheriesresearchinstituteofjiangsuprovince，nantong，jiangsu226007，china）abstract：intersimplesequencerepeat（issr）—pcrwasusedtoanalyzethegeneticvariationandgermplasmidentificationoftendifferentbreedinglinesofpyropiayezoensis.14polymorphicandspecificalprimerswerescreenedandoptimized.fromthegeneratedissrproductsbytheseprimers，97.1%ofthednabandsamplifiedwerepolymorphic.theseprimerscouldbeusedasmoleculargeneticmarkerstodiscriminateandevaluatethetenlines.anumberofpeculiarityamplifiedbandsofprimer826wereappliedtoestablishtheissrcodepatternsofthep.yezoensistenlines.keywords：pyropiayezoensis；issr；germplasmidentification条斑紫菜（pyropiayezoensis）为我国长江以北海区主要栽培的大型经济海藻，在经济藻类产业中占有重要地位。随着栽培规模的不断扩大及海域环境变化，条斑紫菜生产面临着产量不稳、产品质量参差不齐及病害频发等的挑战。保护优良种质资源，开发具抗逆性好及生长速度快等性状的新品种、新品系，是当前条斑紫菜产业可持续发展的重要研究课题。为有效实施紫菜种质资源的保护及科学开发利用，国家级紫菜种质库保存有以条斑紫菜为主的大量紫菜原始种质及育种材料，并对优良的野生或栽培品系进行选择、纯化与扩增培育，为紫菜优良种质的研究与有效利用提供丰富的物质基础。由于仅靠条斑紫菜外部形态等特征，难以对同种类的不同来源或不同品系等进行区分。建立有效的分子标记鉴定方法，既可用于种质鉴定，也能用于分析群体的遗传变异、探索辅助育种技术等。内部简单序列重复（intersimplesequencerepeat，简称issr），是zietkiewicz等于1994年创建，是在微卫星标记（simplesequencerepeats，简称ssr）基础上发展起来的一种标记方法。由于微卫星位点具有普遍的高度变异性，但同一个体又具有稳定的遗传性，通过检测待测样品是否具有目标品种特有的标记指纹片段及其比例，可以有效用于品种鉴定，为育种和种质管理提供了极大的便利。issr标记已广泛应用于多种海藻的遗传作图、生态与进化、分类等；在紫菜种质分析方面也已取得了不少成果，例如，利用该标记分析不同紫菜种类叶状体、坛紫菜不同色泽丝状体鉴定[7]及野生坛紫菜的遗传多样性等。为研究紫菜种质库选育出的不同品系的分子遗传信息及种质鉴定方法，本试验对10个条斑紫菜选育品系进行了issr引物选择扩增，以期为深入研究利用条斑紫菜种质资源和分子标记辅助育种提供基础数据。1材料和方法1.1试验材料选用的10个条斑紫菜选育品系的丝状体样品取自江苏省海洋水产研究所国家级紫菜种质库。1.2研究方法1.2.1dna提取按基因组dna提取试剂盒（taraka，code：dv811a）说明进行总dna提取。1.2.2pcr反应条件及电泳检测pcr扩增采用universityofbritishcolumbia公布的issr引物（第9套引物），引物序列为上海生工（sangon）合成。在经预选得到的38条引物中再进行优选扩增条带稳定、清晰的引物。为便于规范、快速的检测操作，采用退火温度为52℃或54℃进行优化反应条件。pcr扩增的25μl反应体系包含：premixextaq12.5μl（takara，code：d332a）、模板dna1μl、引物1μl、补去离子水10.5μl。pcr扩增条件经优化确定为94℃预变性4min，然后进行36个循环：94℃变性45s，52℃（或54℃）复性45s，72℃延伸2min，循环结束后72℃延伸l0min。扩增产物在minicellec350电泳仪上进行检...