(十)现代生物科技专题1．若要制备某种细菌的基因组文库，需首先将其基因组DNA片段分别导入到大肠杆菌细胞中，某科研小组设计的实验流程如图。回答下列问题：(1)为制备基因组文库，步骤①中的成分X应为该细菌所有的__________(填“mRNA”“DNA”或“cDNA”)。步骤②中的质粒含有氨苄青霉素抗性基因，选用该基因的作用是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(2)限制酶Sau3AⅠ识别序列和切割位点为，限制酶BamHⅠ的识别序列和切割位点为，步骤③中经两种不同限制酶分别切割后的片段可以连接起来，原因是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)步骤⑤中应选用对氨苄青霉素__________(填“敏感”或“不敏感”)的大肠杆菌作为受体菌，转化前通常先用________处理受体菌，使其处于感受态。答案(1)DNA鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的受体细胞筛选出来(2)两种限制酶切割以后产生的黏性末端相同(3)敏感Ca2＋解析(1)基因组文库中包含了一种生物的全部基因，因此步骤①中的成分X应为该细菌所有的DNA，质粒含有的氨苄青霉素抗性基因作为标记基因，其作用是鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的受体细胞筛选出来。(2)限制酶Sau3AⅠ与限制酶BamHⅠ的识别序列和切割位点虽然不同，但二者切割后得到的黏性末端相同，这样就可以把步骤③中经两种不同限制酶分别切割后的片段连接起来。(3)为了方便筛选已导入重组质粒的受体大肠杆菌，步骤⑤中应选用对氨苄青霉素敏感的大肠杆菌作为受体菌，转化前通常先用Ca2＋处理受体菌，使细胞处于能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。2．Bt基因即是苏云金芽孢杆菌基因，因其表达产物Bt毒蛋白杀虫效果好、安全、高效等优点而成为应用最为广泛的转杀虫基因。如图为培育转Bt基因苗的基本操作过程。回答下列问题：(1)Bt基因可从构建的Bt基因组文库中获取，也可以从其cDNA文库中获取，从后者获取的基因__________(填“含有”或“不含有”)启动子。若利用PCR技术从cDNA文库中获取Bt基因(基因序列未知)，需根据Bt毒蛋白的氨基酸序列设计引物，引物的序列可以有多种，原因是________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。在PCR体系中需加入其中的________(填“全部”“任意1种”或“其中2种”)引物。若Bt基因序列已知，则引物的序列通常为______种。(2)在构建基因表达载体的过程中，农杆菌中的________作为载体，作为载体需要具备的特点有________________________________________________________________________________________________________________________________________(答出2点即可)，而能帮助目的基因整合到宿主细胞染色体上的序列称为________________。图示中将目的基因导入受体细胞的方法是________________。(3)步骤Ⅳ和Ⅴ过程要注意控制培养基中__________________的浓度比例，以便获得幼苗。(4)若获得的转基因植株(Bt基因已经整合到植物的基因组中)抗虫的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是____________________________。答案(1)不含有密码子的简并性，一种氨基酸可能对应多种密码子，对应生物DNA碱基序列就会有多种全部2(2)Ti质粒能在宿主细胞内稳定存在并大量复制；有一个至多个限制酶切割位点；具有特殊的标记基因(答出2点即可)TDNA(可转移的DNA)农杆菌转化法(3)生长素和细胞分裂素(4)目的基因的转录或翻译出现异常解析(1)在该基因工程中，Bt毒蛋白基因可从基因组文库中获取，也可从cDNA文库中获取，基因组文库含有非编码区，以mRNA为模板逆转录形成的cDNA中没有非编码区，所以从cDNA文库中获取的目的基因不含位于非编码区的启动子。利用PCR技术从cDNA文库中获取B...
