上海海洋大学水产与生命学院2011年上海市大学生创新项目计划实验开题报告题目斑马鱼尾垂体血管网形成过程的研究负责人姓名梅桂华学号0913214专业生物科学(海洋生物)指导教师吕为群职称博士生导师2012年2月22日说明1、大学生创新实验（设计）工作开始之前，项目组学生需认真填写上海海洋大学水产与生命学院大学生创新项目计划实验开题报告。开题报告重在反映各项目小组的资料准备情况以及详细的实验准备情况。2、学生要认真填写创新实验（设计）工作准备的进展情况，指导教师要定期检查学生的创新实验（设计）的进展情况。3、本开题报告的各部分内容要完整，校、院、系的工作检查将以此作为主要依据。4、本开题报告填写完整后，一式两份，一份交给指导教师，一份交给学院相关负责老师，作为创新实验阶段性考核的主要依据材料。22011年上海市大学生创新项目计划实验开题报告1、实验（设计）的背景及意义：尾部神经分泌系统(CaudalNcurosccrctorySystem，CNSS)是鱼类所特有的一个神经分泌系统，位于脊髓末端，由行使神经分泌功能的尾部神经分泌细胞(Dahlgren细胞)，Dahlgren细胞发出的轴突以及神经血管器官(尾垂体)组成。在真骨鱼类中，Dahlgren细胞的分泌物---尾紧张素I、II（UI、UII）、促肾上腺皮质激素释放因子（CRH）(Luetal.，2004;2006)和甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)(Ingletonetal.,2002)都转送至尾垂体中进行存储，再由此直接分泌进入尾静脉（Arnold-Reedetal.,1991；Winteretal.,2000；McCrohanetal.,2007）以确保其迅速抵达靶器官－肾、肠、性腺和肝脏(HazonandBalment,1998)来发挥调节作用。尾部神经分泌系统在鱼类的渗透压调节、营养代谢以及应激调控等方面发挥重要的作用。尾垂体是尾部脊髓末端的一个神经内分泌结构，是尾部神经分泌系统的重要组成部分，它是由毛细血管网形成的一膨大的神经血管复合体。目前对尾垂体发生发育的研究较少。有关三文鱼(ChumSalmon)研究表明：三文鱼幼体发育3个月会出现一定形状的尾垂体，其中含有被毛细血管包裹的纤维束。在孵化5个月之后，出现典型的尾垂体(Okaetal.,1993;2000)。罗非鱼孵化近8天时出现尾垂体结构，此神经血液器官位于的脊髓末端腹部膨大区域，内部充满血管(Cionietal.,2000)。而有关尾垂体血管网形成过程及其变化还不完全清楚，有待进一步研究。斑马鱼(Brachydaniorerio)，是一种小型热带鱼。作为一种新型的脊椎模式生物，具有性成熟周期短、繁殖能力强、体外受精和发育、胚胎透明等诸多优点。因此，斑马鱼是研究脊椎动物发育的理想模型。转基因斑马鱼(flk1:EGFP)是将增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein,EGFP)标记插入到flk1基因的启动子序列中,获得在血管内皮细胞表面表达EGFP的转基因斑马鱼,因此可以直接在荧光显微镜下观察血管发育情况（丁丽丽etal.,2010）。研究还发现斑马鱼尾部神经分泌系统主要分泌产物UⅡ存在两种类型UIIα和UIIβ（Tostivintetal.,2006)。Parmentier等（2008）报道UIIα和UIIβ只特异性地在尾部神经分泌系统中进行表达。本项目以转基因斑马鱼(flk1:EGFP)为实验对象，通过对尾垂体血管网的形成过程进行研究以确定斑马鱼尾垂体血管网的形成时间和形态变化，并将UⅡ作为一个标志基因用来研究UⅡ在尾垂体中的出现与尾垂体血管网形成过程之间的关系，可为进一步研究尾垂体以及尾部神经分泌系统奠定坚实基础。2、实验（设计）的研究目标：3本项目以转基因斑马鱼(flk1:EGFP)为实验对象，通过形态观察、组织切片以及免疫组化等实验方法，研究斑马鱼尾垂体血管网的形成过程，以确定斑马鱼尾垂体血管网的形成时间和形态变化，并将UⅡ作为一个标志基因用来研究UⅡ在尾垂体中的出现与尾垂体血管网形成过程之间的关系。3、实验（设计）的主要研究内容、研究方法、具体措施和研究的可行性、创新点：研究内容：1.通过荧光显微镜观察转基因斑马鱼(flk1:EGFP)的血管生成情况。2．采用组织切片技术对尾垂体血管网进行细致地研究，确定尾垂体血管网的形成时间和形态变化。3．利用免疫组化技术研究UⅡ在尾垂体中的出现与尾垂体血管网形成过程之间的关系。方法:1.收集转基因斑马鱼（Fli1:EGFP）胚...
