coligrowthcurvemeasurement一、目的1、瞭解細菌生長曲線特徵,測定細菌繁殖的代時;2、學習液體培養基的配製以及接種方法;3、反復練習無菌操作技術;4、瞭解不同細菌,不同接種方法在同一培養基上生長速度的不同;5、掌握利用細菌懸液混濁度間接測定細菌生長的方法6、複習光電比濁法測量細菌數量的方法7、學習平板塗布技術二、原理1、大腸桿菌生長:將一定量的細菌接種在液體培養基內,在一定條件下培養,可觀察到細菌的生長繁殖有一定的規律性,如以細菌的活菌數的對數作縱坐標,以培養時間作橫坐標,可繪成一條曲線,成為生長曲線(如圖一)
圖一微生物生長曲線示意圖單細胞微生物的發酵具有四個階段,即Ⅰ調整期(延滯期)、Ⅱ對數期(生長旺盛期)、Ⅲ平衡期(穩定期)、Ⅳ死亡期(衰亡期)
生長曲線可表示細菌從開始生長到死亡的全過程的動態
不同的微生物有不同的生長曲線,同一種微生物在不同的培養條件下,其生長曲線也不一樣
因此,測定微生物的生長曲線對於瞭解和掌握微生物的生長規律是很有幫助的
測定微生物生長曲線的方法很多,有血球計數板法、平板菌落計數法、稱重法和比濁法等
本實驗採用比濁法測定,由於細菌懸液的濃度與混濁度成正比,因此,可利用分光光度計測定細菌懸液的光密度來推知菌液的濃度
將所測得的光密度值(OD600)與其對應的培養時間作圖,即可繪出該菌在一定條件下的生長曲線
注意,由於光密度表示的是培養液中的總菌數,包括活菌與死菌,因此所測定的生長曲線的衰亡期不明顯
2、平板塗布技術:塗布法接種是一種常用的接種方法,不僅可以用於計算活菌數,還可以利用其在平板表面生長形成菌苔的特點用於檢測化學因素對微生物的抑殺效應
原理:將一定濃度,一定量的待分離菌懸液加到已凝固的培養基平板上,再用塗布棒快速地將其均勻塗布,使長出單菌落或菌苔而達到分離或計數的目的
其目的:用於目的微生物的分離;用於藥物的抑