天然多糖一些参数的测定VIP免费

天然多糖提取物一些参数的的测定李老师（浙大国家大学科技园，杭州哲博化工科技有限公司哲博检测中心，Email：zhebocs@163.com,杭州310013）天然多糖提取物由于工艺复杂，杂质众多，需要对其质量有效控制。常见的参数包括糖醛酸的测定、粘度的测定、蛋白质杂质测定等。本文简要介绍如下：一.特性粘度精密称取本品0.1~0.11g，根据所测得干燥失重，用公式：样品质量*（1-干燥失重%）计算出绝对干品质量以此计算后面的样品浓度。将样品于100ml量瓶中用0.2mol/l氯化钠定容至刻度，配成浓度为0.02、0.03、0.04、0.05g/100ml的系列样品液。将空白溶剂（0.2mol/l氯化钠）和上述4个样品溶液分别用3号垂熔玻璃漏斗过滤，弃去初滤液，然后各取续滤液5ml，用内径0.5~0.6mm的乌式粘度计，在25°C下分别测定它们的流出时间T。（空白溶剂）和Ti（样品液），每个样品液的流出时间测两次，取平均值（两次读数相差不得超过0.2s）。计算：相对粘度ηr=Ti/To；增比粘度ηsp=ηr-1然后以增比粘度ηsp/Ci为纵坐标，Ci为横坐标（Ci单位为g/100ml）作图，该回归直线与纵轴的截距为特性粘度η二.蛋白质含量的测定——Bradford染料结合法该法又称考马斯亮蓝法。其原理是：染料考马斯亮蓝与蛋白质结合后最大吸收波长由456nm移至595nm，测得的595nm处的吸收度与蛋白质浓度呈线性关系。特点：灵敏度高，最低检出限可达1μg。BSA作为对照品。本法有专用试剂盒（Brafordreagent，Sigma）1.考马斯亮蓝试液的配制：考马斯亮蓝100mg溶于95%乙醇50ml中，再加85%磷酸100ml，最后加水稀释至800ml，用2号滤纸过滤备用。2.标准曲线制作：取BSA10mg，精密称定，置于100ml量瓶中，加水溶解稀释至刻度，制得100μg/ml的BSA对照液。3.配制：取具塞试管6支，分别加入BSA标准液0.0、0.05、0.1、0.2、0.4、0.6ml，均补加水至1.0ml得到含BSA为0、5、10、20、40、60μg的标准系列。分别加入考马斯亮蓝试液4ml，立即混匀。4.测定和作图：5min后在595nm波长处用1cm比色池测定吸收度。以BSAμg数对吸收度作图得标准曲线或计算出直线回归方程。5.样品测定：精密称定透明质酸钠500mg，置于100ml量瓶中，加水溶解至刻度。取1ml于具塞刻度试管中，以下同标准曲线项下测定吸收度。从标准曲线得到蛋白质μg数，以此计算样品的蛋白质含量。三.葡萄糖醛酸——咔唑法1.试剂配制（1）硼砂硫酸液：称取四硼酸钠4.77g溶于浓硫酸（AR）500ml中即得；（2）咔唑试液：称取咔唑0.125g溶于乙醇（AR）100ml中，置于棕色瓶中冰箱内保存。2.标准曲线的制作精密称取葡萄糖醛酸（AR）20mg，置于100ml量瓶中，加水溶解至刻度，摇匀备用。精密量取标准溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml，分别加入10ml量瓶中，加水稀释至刻度，得10、20、30、40、50μg/ml弄得对照品溶液。取6只具塞刻度试管分别加入硼砂硫酸液5ml，置于冰浴中冷却至4℃左右，然后分别取空白溶液（蒸馏水）和不同浓度的对照品溶液各1ml加入试管中。先轻轻振摇，再充分摇匀并不断用冰浴冷却。将试管置于沸水中加热10min，于常温水浴中冷至室温。加入咔唑试剂0.2ml混匀，水浴中再加热15min后冷至室温。在530nm处测定吸收度A，以吸收度对浓度C作图即可绘制出标准曲线或做直线回归数据处理，计算出吸收度和浓度的线性回归方程：C=b+kA（b为截距，k为斜率）。3.样品测定取样品0.1g/l的溶液1ml，照标准曲线项下的方法测定吸收度。从标准曲线上查出相应的葡萄糖醛酸的浓度，按下式计算含量：葡萄糖醛酸%=（标准曲线查出的浓度/样品液浓度）/（1-干燥失重%）*100%