组织分布大讨论VIP免费

1、我的实验要做一个药在小鼠里的组织分布。老板说进药后，取器官前要用盐水冲洗器官，以消除血液影响。请问这个实验怎么操作啊？我查了文献，都没有说到这一步。谢谢了！在试验操作中，可能会在器官表面沾染一些血液，而血液中药物的含量是较高的（尤其是静脉给药时），必然会影响试验结果的准确性。因此需要用生理盐水清洗器官和组织表面沾染的血液。具体方法很简单，吸管吸取少量盐水清洗器官或组织的表面，直至无残留血迹，然后以滤纸吸干残液即可。注意不可清洗时间太长，或者将器官或组织在盐水中浸泡，以防其中药物损失。2、我做一小鼠的组织分布实验,组织匀浆后,加二氯甲烷正己烷萃取,离心后取上清液,吹干,加流动相溶解,有时会澄清一些,有时会混浊一些,为什么会出现这种情况呢?高速离心也没用.希望高手指点迷津.有可能提取率不太稳定，将匀浆液中极性较小的物质提出来了，流动相的极性较大而析出，另一方面，你的药物在流动相中的溶解度如何？还有就是提取溶剂的纯度如何，不妨用重蒸的提取溶剂。呵呵，应该是萃取过程中常见的乳化现象！我做这个试验也遇到过这种问题，采用加热、震荡、用铅笔敲等，效果还行，但不能完全消除乳化！本人作组织匀浆有一段时间了，我分析可能的原因有：第一，取上层溶液时扰动了离心后的平衡液面。第二，如果匀浆后的组织在室温下放置的时间太长容易出现上述情况，可以将匀浆液先在冰箱中稍微冷冻一会再萃取上述现象就会消失。3、建议组织分布动物与药代的一种动物相同,这样数据才有可比的相关性,而组织分布的动物要与主要药效实验的动物最好一致,正如chengtianle所述,药效做荷瘤鼠,组织分布与药代的一种动物最好也用小鼠.4、一般多用大鼠或小鼠，狗的组织分布很少有人做。但就申报新药而言，目前最为常见的是大鼠。因为选用大鼠或小鼠做组织分布试验较为方便。选择一个剂量（一般以有效剂量为宜）给药后，至少测定药物在心、肝、脾、肺、肾、胃肠道、生殖腺、脑、体脂、骨骼肌等组织的浓度，以了解药物在体内的主要分布组织。特别注意药物浓度高、蓄积时间长的组织和器官，以及在药效或毒性靶器官的分布（如对造血系统有影响的药物，应考察在骨髓的分布）。参考血药浓度-时间曲线的变化趋势，选择至少3个时间点分别代表吸收相、平衡相和消除相的药物分布。若某组织的药物浓度较高，应增加观测点，进一步研究该组织中药物消除的情况。每个时间点，至少应有5个动物的数据。5、我现在在做一个剂型的组织分布试验，让我烦恼的的是，试验的重复性很差，相同的剂量，相同的时间点，不同的小鼠的同一个组织药物浓度差别很大，有2-3倍差别。有人遇到过这样的问题吗？小鼠的组织分布试验中，小鼠个体差异本来就大，且容易污染，取组织应该从周边组织开始取，动物试验很关键。我觉得是否要考虑以下几点：a药物是否稳定（在各种情况下），是否经过一个完整的分析方法学考核。标准曲线的重现性很好不能说明药物在脏器中的稳定性好。b采集样本时，尤其是一些储血器官，需要先用生理盐水将其血管中残留血冲洗干净，因为血浆中的药浓往往比脏器中的高出很多，是否这种残留导致了不平行。c如果确实是脏器中的浓度相差较大，应该具体分析是给药后短时间相差大还是一直相差大，短时间相差大在吸收、分布个体差异大的情况下也是有可能的。6、本人做做组织分布做了大半学期，还是做不好。现在有问题想请教a我把组织取出后，用6%高氯酸匀浆，然后离心，取上清液直接进样HPLC检测，这样做有问题吗？药物是水溶性的。b每次进样后，压力总是升高很多，而且一直在波动，进样之前，已经冲的很平了，我没有用梯度洗脱。A这样做原则上没有问题，但具体说来要考虑组织蛋白的沉淀率，即用6%高氯酸匀浆能否将蛋白沉淀完全，而且直接把组织匀浆和沉淀蛋白放在同一步进行有点不妥，6%高氯酸能使蛋白变性沉淀，能否保证组织匀浆的均匀性？建议先加组织重量1-2倍的水匀浆，然后取一定量的匀浆用6%高氯酸沉淀蛋白，离心后取上清液直接进样HPLC检测。蛋白沉淀剂还有其他的，如甲醇、乙腈等，可根据文献选取。B直接沉淀蛋白进样往往会造成柱压升高，主要还是蛋白沉淀不完全所致。。...