实验三细胞骨架的光学显微镜观察一、实验目的掌握植物细胞骨架的光镜标本制作方法。细胞骨架是指细胞质中纵横交错的纤维网络结构，按组成成分和形态结构的不同可分为微管、微丝和中间纤维。它们对细胞形态的维持、细胞的生长、运动、分裂、分化和物质运输等起重要作用。光学显微镜下细胞骨架的形态学观察多用1%TritonX-100处理细胞，可使细胞膜溶解，而细胞骨架系统的蛋白质被保存，再用考马斯亮兰R250染色，使得胞质中细胞骨架得以清晰显现。二、材料、试剂和仪器1．材料新鲜洋葱鳞茎、人口腔上皮细胞2．试剂1）M缓冲液（pH7.2）各成分终浓度为：50mmol/L咪唑(MW:68.08),50mmol/LKCl(MW:74.55),0.5mmol/LMgCl2?6H2O(MW:203.30),1mmol/LEGTA(MW:380.36),0.1mmol/LEDTA-Na2(MW:372.24),1mmol/LDTT(MW:154.3)2）6mmol/LPBS磷酸缓冲液（pH6.5）:KH2PO4:Na2HPO4?2H2O=7:3(见附录3查磷酸缓冲液的配置)3）0.7%NaCl生理盐水4）1%TritonX-100(聚乙二醇辛基苯基醚)溶于M-缓冲液5）3%戊二醛100mL:25%戊二醛取12mL,PBS88mL6）0.2%考马斯亮蓝R250染液200mL:考马斯亮蓝R2500.2g,甲醇46.5mL,冰乙酸7mL,蒸馏水46.5mL3．仪器光学显微镜，镊子，剪刀，试管，表面皿，滴管，载玻片，盖玻片,灭菌牙签，1.5mL离心管，1mL吸头，1mL取液器，酒精灯，染色缸细胞骨架动画三、实验程序四、结果与分析洋葱鳞茎外层与内层的表皮细胞比较（放大倍数10×20）五、思考题1．光镜下观察到的细胞骨架有何形态特征？2．对实验成功或失败的原因进行讨论。实验中的注意事项和关键步骤
