细胞生物学实验报告实验六实验名称细胞骨架显示——微丝的观察1、画出所观察到的微丝图像。2、对实验成功或失败的原因进行分析讨论。本次试验成功的观察到了微丝，但存在一些小问题。1．染色不完全，但是着色部分可观察：实验时应用吸管轻轻吸打，防止洋葱鳞茎内表皮卷曲、折叠，若卷曲折叠可以在洗涤的过程中慢慢展开，若没展开，在制片时用镊子小心的将内表皮展开，观察着色部分。2．细胞内除骨架蛋白外有少量着色物质：TritonX-100处理时间应足够，处理完洗涤应充分，否则胞内会存在膜泡状结构及其它杂蛋白，干扰骨架染色及观察；此外，尽量保证各组各步处理的时间和方法一致。3．TritonX-100处理后各步操作应轻柔，避免容器剧烈震荡及吸管吹打过猛引起骨架蛋白束断裂。3、说明在实验中用1%TritonX-100处理细胞的作用。用适当浓度的TritonX-100处理植物细胞，可以抽提掉细胞质内的可溶性蛋白和脂类，而骨架蛋白却保存完好。4、根据M-缓冲液的成分分析其作用在M-缓冲液中：（1）咪唑是缓冲剂，稳定pH值。（2）MgCl2提供Mg离子，KCl提供K离子，对骨架起聚合作用。（3）EGTA和EDTA螯合Ca离子，在低钙条件下，骨架纤维保持聚合状态并且较为舒张，便于观察。（4）巯基乙醇是抗氧化剂，还原二硫键，稳定骨架结构。5、简述微丝动态平衡过程中各种条件及作用。有些细胞内，微丝的结构相当稳定，形成永久性的结构，但在大多数非肌肉细胞中，微丝是一种暂时性的动态结构，根据生理状况不断地进行组装和去组装，从而维持细胞的形态及参与细胞运动。（1）肌动蛋白结合蛋白：在合适的条件下，结合ATP的肌动蛋白既可以参与微丝正极端的组装，也可以在负极端进行组装。（2）成核蛋白：成核蛋白Arp2/3复合物、形成蛋白等催化成核过程，以实现细胞形态和运动状态的快速变化。（3）加帽蛋白：与微丝末端结合阻止微丝解聚或过度组装。（4）细胞内微丝的排列方式有两种：束状排列和网状排列。排列方式主要由微丝交联蛋白的种类决定。成束蛋白：将相邻的微丝交联成平行排列。如丝束蛋白、绒毛蛋白、α-辅肌动蛋白。凝胶形成蛋白：将微丝连接成网状。如细丝蛋白、血影蛋白。（5）割断及解聚蛋白：在细胞迁移或其他运动过程中，细胞需要将特定区域的微丝快速解聚，或者是形成大量的末端以加速组装。凝溶胶蛋白：能将较长微丝切成片段，使肌动蛋白由凝胶态向溶胶态转化。丝切蛋白/肌动蛋白解聚因子：能与肌动蛋白单体或微丝结合，提高微丝的解聚速度。
