真核细胞常见表达载体VIP免费

1、pCMVp-NEO-BAN载体特点:该真核细胞表达载体分子量为6600碱基对，要紧由CMVp启动子、兔β-球蛋白基因内含子、聚腺嘌呤、氨青霉素抗性基因和抗neo基因和pBR322骨架组成，在大多数真核细胞内都能高水平稳固地表达外源目的基因。更重要的是，由于该真核细胞表达载体中抗neo基因存在，转染细胞后，用G418挑选，可成立稳固的、高表达目的基因的细胞株。插入外源基因的克隆位点包括Sal1、BamH1和EcoR1位点。注意在此载体中有二个EcoR1位点存在。2、pEGFP,增强型绦色荧光蛋白表达载体(EnhancedFluorecentProteinVector)特点:pEGFP表达载体中含有绿色荧光蛋白，在PCMV启动子驱动下，在真核细胞中高水平表达。载体骨架中的SV40origin使该载体在任何表达SV40T抗原的真核细胞内进行复制。Neo抗性盒由SV40初期启动子、Tn5的neomycin/kanamycin抗性基因和HSV-TK基因的聚腺嘌呤信号组成，能应用G418挑选稳固转染的真核细胞株。另外，载体中的pUCorigin能保证该载体在大肠杆菌中的复制，而位于此表达盒上游的细菌启动子能驱动kanamycin抗性基因在大肠杆菌中的表达。用途:该表达载体EGFP上游有Nde1、Eco47111和Age1克隆位点，将外源基因扦入这些位点，将合成外源基因和EGFP的融合基因。借此可确信外源基因在细胞内的表达和/或组织中的定位。亦可用于检测克隆的启动子活性(取代CMV启动子,Acet1-Nhe1)。3、pEGFT-Actin,增强型绿色荧光蛋白/人肌动蛋白表达载体特点:pEGFP-Actin表达载体中含有绿色荧光蛋白和人胞浆β-肌动蛋白基因，在PCMV启动子驱动下，在真核细胞中高水平表达。载体骨架中的SV40origin使该载体在任何表达SV40T抗原的真核细胞内进行复制。Neo抗性盒由SV40初期启动子、Tn5的neomycin/kanamycin抗性基因和HSV-TK基因的聚腺嘌呤信号组成，能应用G418挑选稳固转染的真核细胞株。另外，载体中的pUCorigin能保证该载体在大肠杆菌中的复制，而位于此表达盒上游的细菌启动子能驱动kanamycin抗性基因在大肠杆菌中的表达。用途:pEGFP-Actin载体在真核细胞表达EGFP-Actin融合蛋白，该蛋白能整合到胞内正在生的肌动蛋白，因此在活细胞和固定细胞中观看到细胞内含肌动蛋白的亚细胞结构。4、pSV2表达载体特点：该表达质粒是以病责SV40启动子驱动在真核细胞目的基因进行表达的，克隆位点为Hind111。SV40启动子具有组织/细胞的选择特异性。此载体不含neo基因，故不能用来挑选、成立稳固的表达细胞株。5、CMV4表达载体特点:该真核细胞表达载体由CMV启动子驱动，多克隆区域酶切位点选择性较多。含有氨苄青霉素抗性基因和生长基因片段和SV40复制原点和fl单链复制原点。但值得注意的是，该表达载体不含有neo基因，转染細胞后不能用G418挑选稳固的表达细胞株。其他经常使用克隆Vector：pBluscriptIIKSDNA15ugpUC18DNA25ugpUC19DNA25ug说明:pBluescriptIIkS、pUC18&Puc19载体适合于DNA片段的克隆、DNA测序和对外源基因进行表达等。这些载体由于在lacZ基因中含有多克隆位点，当外源DNA片段扦入，转化lacZ基因缺乏细胞，并在含有IPTG和X-gal的培育基上培育时，含有外源DNA载体的细胞将为白色菌落，而无外源DNA片段载体的细胞那么为兰色菌落，由此易于挑选有无外源DNA片段的载体。另外，这些载体中有便于测序的M13、T7和T3的通用引物进行DNA测序。保留液:TEBufferTEBuffer组成:10mMTris.HCL(Ph8.0)1mMEDTA用途:克隆外源DNA片断.进行基因表达.利用M13、T7和T3引物进行测序.存在的问题细胞的生命活动是一个复杂的调控进程，有些生命活动的机理还不完全清楚，由于插人的目的基因不同，载体构建栗用的顺式组件不同，组装的空间位置不同，采纳的表达系统不同，目的基因表达水平和阳性克隆挑选率都会有专门大不同。另外，由于所有的顺式元件存在种属和组织特异性，所构建的高效表达载体不必然在所有细胞株中均高效表达。再者，细胞生长状态的不同，转染方式的不同培育时阉的长短，挑选药物浓度的高低，对表达量都有专门大阻碍。因此，需要综合评判一个表达载体和表达系统，排除一些不定因素，挑选出最正确组合真核表达载体趋向于既有利于扩增目的基因又有利于挑选阳性克隆的载体的构建。许多有效的应用范围广的强启...