第三章抗体制药 医学教学课件VIP免费

第三章抗体制药〔二〕3学时1第三章抗体制药第一页，共六十六页。三、多功能抗体及其制备近年来，在scFv〔单链抗体〕的根底上，可以把两个或两个以上的scFv重组在一起，由此可制备成多价小分子抗体即微型抗体〔简称多价微抗〕。包括双链抗体〔diabody〕，三链抗体〔triabody〕，微型抗体〔minibody〕及四链抗体〔tetrabody〕。2第三章抗体制药第二页，共六十六页。多功能抗体及其制备双链抗体制备方法：化学交联法、粘性蛋白结构域融合法和接头长度控制法。微型抗体：通过基因工程手段采用不同的接头把单链抗体〔VL-VH)的VH结构域与IG的CH3结构域融合，形成VL-VH-CH3的结构。此种抗体合成后通过CH3结构域形成稳定的二聚体形式，发挥其双价微抗的作用。三链抗体：在制备单链抗体时，当接头的长度为2个或2个以下氨基酸残基时，或者直接把VH结构域N末端与VL结构域C末端相连，通过非共价键而形成三聚体，称三链抗体。3第三章抗体制药第三页，共六十六页。4第三章抗体制药第四页，共六十六页。抗体融合蛋白抗体的一局部被非抗体序列替代，所形成的融合蛋白具有新的特性，称之为抗体融合蛋白。根据构建方式的不同，抗体融合蛋白主要分为两种形式：5第三章抗体制药第五页，共六十六页。构建抗体融合蛋白的原那么将第一个蛋白的终止密码子删除，再接上带有终止密码子的第二个蛋白基因，即可实现两个基因的共表达。抗体酶，酶-抗体型融合蛋白，在药物治疗中有广阔的前景，它可在靶向位置上将前体药物转化成有效的药物，从而防止了对正常组织的损害。6第三章抗体制药第六页，共六十六页。四、基因工程抗体和抗体工程抗体研究的三大阶段：1890年白喉抗毒素－－多克隆抗体；1975年杂交瘤技术－－单克隆抗体；1994年开始－－基因工程抗体基因工程抗体：不用人工免疫动物和细胞融合技术，完全用基因工程技术制备人源性抗体，而且还能利用基因转移和表达技术，通过细菌发酵或转基因动物、植物大规模生产抗体。7第三章抗体制药第七页，共六十六页。8第三章抗体制药第八页，共六十六页。噬菌体抗体库技术的根本方法获取目的基因抗体库技术的载体淘筛表达与鉴定9第三章抗体制药第九页，共六十六页。获取目的基因和载体获取目的基因：提取mRNA经反转录PCR获取抗体某一特定基因区段，抗体基因的组合形式多为单链抗体。抗体库技术的载体：噬菌体载体具有噬菌体和质粒的共同特点。10第三章抗体制药第十页，共六十六页。淘筛、表达与鉴定淘筛：抗原固相化后，对噬菌粒群的吸附、洗涤和洗脱后再感染扩增，与辅助噬菌体超感染获得大容量次级文库，反复使目的克隆大量扩增。表达与鉴定：目的克隆经过鉴定后，再导入感受态菌，进行可溶性表达。11第三章抗体制药第十一页，共六十六页。噬菌体抗体库技术12第三章抗体制药第十二页，共六十六页。噬菌体抗体库的分类13第三章抗体制药第十三页，共六十六页。噬菌体展示技术14第三章抗体制药第十四页，共六十六页。15第三章抗体制药第十五页，共六十六页。噬菌体抗体库技术的特点模拟天然全套抗体库避开了人工免疫和杂交瘤技术可获得高亲和力的人源化抗体。16第三章抗体制药第十六页，共六十六页。噬菌体展示技术最关键的优势17第三章抗体制药第十七页，共六十六页。噬菌体抗体库技术的优势18第三章抗体制药第十八页，共六十六页。单克隆抗体杂交瘤技术和噬菌体抗体展示技术比较19第三章抗体制药第十九页，共六十六页。基因工程抗体的表达原核生物：大肠杆菌，分融合表达和分泌表达；真核生物：都是分泌表达，有酵母、昆虫细胞、中国仓鼠卵细胞和真菌。转基因植物：烟草转基因动物：单基因水平。20第三章抗体制药第二十页，共六十六页。抗体在体外人源化存在的问题操作过程复杂本钱高抗体的亲和力降低抗体不是人体免疫系统自然产生异源抗体与免疫系统的配合21第三章抗体制药第二十一页，共六十六页。最理想的单克隆抗体：100％人源化，由人体免疫系统自然产生。全人抗体的理论根底：▲癌症、病毒、细菌对机体而言均为异己物；▲人体不断受异己物攻击，但免疫系统通常有去除能力；▲免疫系统...