第三章抗体制药〔二〕3学时1第三章抗体制药第一页，共六十六页。三、多功能抗体及其制备近年来，在scFv〔单链抗体〕的根底上，可以把两个或两个以上的scFv重组在一起，由此可制备成多价小分子抗体即微型抗体〔简称多价微抗〕。包括双链抗体〔diabody〕，三链抗体〔triabody〕，微型抗体〔minibody〕及四链抗体〔tetrabody〕。2第三章抗体制药第二页，共六十六页。多功能抗体及其制备双链抗体制备方法：化学交联法、粘性蛋白结构域融合法和接头长度控制法。微型抗体：通过基因工程手段采用不同的接头把单链抗体〔VL-VH)的VH结构域与IG的CH3结构域融合，形成VL-VH-CH3的结构。此种抗体合成后通过CH3结构域形成稳定的二聚体形式，发挥其双价微抗的作用。三链抗体：在制备单链抗体时，当接头的长度为2个或2个以下氨基酸残基时，或者直接把VH结构域N末端与VL结构域C末端相连，通过非共价键而形成三聚体，称三链抗体。3第三章抗体制药第三页，共六十六页。4第三章抗体制药第四页，共六十六页。抗体融合蛋白抗体的一局部被非抗体序列替代，所形成的融合蛋白具有新的特性，称之为抗体融合蛋白。根据构建方式的不同，抗体融合蛋白主要分为两种形式：5第三章抗体制药第五页，共六十六页。构建抗体融合蛋白的原那么将第一个蛋白的终止密码子删除，再接上带有终止密码子的第二个蛋白基因，即可实现两个基因的共表达。抗体酶，酶-抗体型融合蛋白，在药物治疗中有广阔的前景，它可在靶向位置上将前体药物转化成有效的药物，从而防止了对正常组织的损害。6第三章抗体制药第六页，共六十六页。四、基因工程抗体和抗体工程抗体研究的三大阶段：1890年白喉抗毒素－－多克隆抗体；1975年杂交瘤技术－－单克隆抗体；1994年开始－－基因工程抗体基因工程抗体：不用人工免疫动物和细胞融合技术，完全用基因工程技术制备人源性抗体，而且还能利用基因转移和表达技术，通过细菌发酵或转基因动物、植物大规模生产抗体。7第三章抗体制药第七页，共六十六页。8第三章抗体制药第八页，共六十六页。噬菌体抗体库技术的根本方法获取目的基因抗体库技术的载体淘筛表达与鉴定9第三章抗体制药第九页，共六十六页。获取目的基因和载体获取目的基因：提取mRNA经反转录PCR获取抗体某一特定基因区段，抗体基因的组合形式多为单链抗体。抗体库技术的载体：噬菌体载体具有噬菌体和质粒的共同特点。10第三章抗体制药第十页，共六十六页。淘筛、表达与鉴定淘筛：抗原固相化后，对噬菌粒群的吸附、洗涤和洗脱后再感染扩增，与辅助噬菌体超感染获得大容量次级文库，反复使目的克隆大量扩增。表达与鉴定：目的克隆经过鉴定后，再导入感受态菌，进行可溶性表达。11第三章抗体制药第十一页，共六十六页。噬菌体抗体库技术12第三章抗体制药第十二页，共六十六页。噬菌体抗体库的分类13第三章抗体制药第十三页，共六十六页。噬菌体展示技术14第三章抗体制药第十四页，共六十六页。15第三章抗体制药第十五页，共六十六页。噬菌体抗体库技术的特点模拟天然全套抗体库避开了人工免疫和杂交瘤技术可获得高亲和力的人源化抗体。16第三章抗体制药第十六页，共六十六页。噬菌体展示技术最关键的优势17第三章抗体制药第十七页，共六十六页。噬菌体抗体库技术的优势18第三章抗体制药第十八页，共六十六页。单克隆抗体杂交瘤技术和噬菌体抗体展示技术比较19第三章抗体制药第十九页，共六十六页。基因工程抗体的表达原核生物：大肠杆菌，分融合表达和分泌表达；真核生物：都是分泌表达，有酵母、昆虫细胞、中国仓鼠卵细胞和真菌。转基因植物：烟草转基因动物：单基因水平。20第三章抗体制药第二十页，共六十六页。抗体在体外人源化存在的问题操作过程复杂本钱高抗体的亲和力降低抗体不是人体免疫系统自然产生异源抗体与免疫系统的配合21第三章抗体制药第二十一页，共六十六页。最理想的单克隆抗体：100％人源化，由人体免疫系统自然产生。全人抗体的理论根底：▲癌症、病毒、细菌对机体而言均为异己物；▲人体不断受异己物攻击，但免疫系统通常有去除能力；▲免疫系统...
