ELISA讲义VIP免费

ELISA、酶标仪、洗板机第一页，共四十九页。原理类型试剂准备对照标本结果免疫测定依靠的是抗原抗体反应抗原抗体反应的四个特性1抗原抗体反应首先是可逆性抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡，其反应式为：Ag+Ab→Ag·Ab抗体的亲和力（affinity），可以用平衡常数K表示：K=[Ag·Ab]／[Ag][Ab],Ag·Ab的解离程度与K值有关。高亲和力抗体的抗原结合点与抗原的决定簇在空间构型上非常适合，两者结合牢固。结合后可解离，解离后的抗原或抗体均能保持原有的结构和活性。第二页，共四十九页。原理类型试剂准备对照标本结果2抗原抗体反应其次是特异性抗原抗体的结合发生在抗原的决定簇与抗体的结合位点之间。化学结构和空间构型互补关系，具有高度的特异性。测定某一特定的物质，而不需先分离待检物。第三页，共四十九页。原理类型试剂准备对照标本结果3抗原抗体反应显现需合适比例第四页，共四十九页。原理类型试剂准备对照标本结果4抗原抗体反应的敏感性化学比色法的敏感度为mg/ml水平酶反应测定法的敏感度约为5-10μg/ml免疫测定中酶标记的免疫测定，由于酶的催化效率很高，间接放大了免疫反应的结果，因此酶联免疫测定的敏感度可提高数千倍，达ng/ml水平例如，HBsAg，其敏感度可达0.1ng/ml。第五页，共四十九页。原理类型试剂准备对照标本结果免疫测定在临床检验中的应用由于各种抗原成份，包括小分子的半抗原，均可用以制备特异性的抗血清或单克隆抗体，利用此抗体作为试剂就可检测标本中相应的抗原，因此免疫测定的应用范围极广。如性激素的残留测定第六页，共四十九页。原理类型试剂准备对照标本结果酶免疫测定类型酶免疫技术酶免疫组化酶免疫测定均相酶免疫测定非均相酶免疫测定固相酶免疫测定液相酶免疫测定第七页，共四十九页。原理类型试剂准备对照标本结果酶联免疫吸附测定法(enzyme-linkedimmuno-sorbentassay,ELISA)。1971年瑞典、荷兰学者报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，即酶联免疫吸附测定法(ELISA)。ELISA现在已成为目前分析化学领域中的前沿课题，它是一种特殊的试剂分析方法，是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术（immunoassay，IA）。ELISA检测方法的关键基础:1.抗原或抗体的固相化。2.抗原或抗体的酶标记。第八页，共四十九页。原理类型试剂准备对照标本结果基本原理它采用抗原与抗体特异的免疫反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，显色产物的量与标本中受检物质的量直接相关，因此用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。在这种测定方法中有3种必要试剂：①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂）②酶标记的抗原或抗体（标记物）③酶作用的底物（显色剂）第九页，共四十九页。原理类型试剂准备对照标本结果测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物（标记物），此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上的抗原（抗体）发生免疫反应结合后，再加上酶的相应底物，即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。第十页，共四十九页。原理类型试剂准备对照标本结果其所生成的颜色深浅与欲测的抗原（抗体）含量成正比。这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察，也可以用分光光度计（酶标仪）加以测定。其方法简单，方便讯速，特异性强。第十一页，共四十九页。原理类型试剂准备对照标本结果酶标（ELISA）ELISA是酶联接免疫吸附剂测定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的简称。以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术自上世纪70年代初问世以来，发展十分迅速，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。第十二页，共四十九页。原理类型试剂准备对照标本结果1.ELISA的原理2.ELISA的类型3.试剂准备：免疫吸附剂结合物酶底物的准备4.对照设定5.标本的采取和保存6.结果判断第十三页，共四十九页。原理类型试剂准备对照标本结果ELISA是一种免疫测定（immunoassay，IA）。基础:抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记...