ARMS法检测VIP专享VIP免费

ARMS法ARMS法技术ARMS法与测序法比较ARMS原理ARMS应用目前，突变扩增阻滞系统（amplificationrefractorymutationsystem，ARMS）已成为国际上肿瘤个体化分子检测最重要、最先进的技术之一，其在临床应用中的优势已被业内专家广泛认可。ARMS技术优点ARMS方法检测灵敏度明显高于直接测序法等其他方法（表1），可检测出样品中含量低至0.1-1.0%的突变基因；该方法在设计上可以最大限度地缩短目标产物的长度，可以解决石蜡包埋组织标本提取的DNA大部分片段化而无法得到准确检测结果的难点；该方法结合实时PCR平台实现扩增时闭管操作，操作简单，无需产物的后处理，能最大程度地避免扩增产物的污染。表1ARMS法与测序法比较测序法ARMS法敏感度10-20%1%FFPE标本成功率低高商用试剂盒无有流程与速度复杂\慢简单\快数据分析要求高低试剂成本低略高仪器成本高低假阳性机会（交叉污染）多少其中ARMS检测可以分为实时荧光定量PCR和巢式ARMS法电泳检测。实时荧光定量PCRARMS技术利用特异引物对突变靶序列进行高精准PCR扩增放大，与此同时，利用探针对扩增产物进行检测，在实时荧光定量PCR平台上实现对样品DNA中稀有突变的检测，以达到对基因突变检测的高特异性和高灵敏度。该技术所用探针为Scorpion探针，Scorpion探针是一种新型的探针，由一条发夹结构的探针和一条引物构成，探针的5'端和3'端分别标有报告荧光和淬灭荧光，3'端通过PCRblocker（一个非扩增的单体,防止探针退火后的延伸）与引物的5'端相连。在自由状态，报告荧光和淬灭荧光很接近，不产生荧光。变性阶段茎环结构打开，退火时引物与模板结合并延伸，环区与新合成的目的基因的互补区域结合，此时Scorpion探针与PCR产物在同一条DNA链上，是分子内的结合。由于发夹结构打开，报告荧光和淬灭荧光分离，因此可检测到报告荧光发出的荧光信号。由于Scorpion探针中序列特异性引物和探针在同一分子上，因此信号的产生特别快。巢式ARMS法电泳检测利用PCR引物的3’端末位碱基必须与其模板DNA互补才能有效扩增的原理，设计等位基因特异性PCR扩增引物，在严格的条件下，只有在引物3’碱基与模板配对时才能出现PCR扩增带，从而检测出突变，该法省去了探针杂交操作。基本原理在PCR扩增时，引物的延伸是从其3"未端开始的，而这种延伸的进行要求引物3"端的碱基与模板需完全配对，只有这样引物才能延伸，扩增才得以进行下去而得到预期的扩增产物，若引物3"端与模板不能配对，则引物的延伸即阻断，不能得到相对应的扩增产物，基于以上事实，可利用3"端含突变碱基的引物来检测靶DNA中有无相应的突变位点，此即3"特异PCR，扩增阻滞突变系统及等位特异PCR.该反应系统包含两个PCR扩增反应，有两对引物但它们的3"端有差异，一为正常引物，另一为3"端编食突变的引物，正常引物只与正常模板互解，PCR时扩增相应的产物，而食突变的引物只与突变的模板附扩增出相应的产物.扩增完成后可直接同琼脂糖电泳技术检测分析结果。碱基配合、或错配，决定PCR能不能进行PCR产物一边长，而另一边短，通过电泳，就可以方便地确定哪一边扩出来了，就是碱基配合的；反之，没有扩出来的，那一边引物的最后一个碱基是错配的2组对称的实验，把最终的SNP型确定下来。利用该系统进行基因突变检测时不仅能检出突变的纯合子，而且能检出杂合子个体，在这种情况下，同一个体的DNA模板利用突变引物和正常引物均能引发扩增反应.尚可利用多对突变引物和正常引物进行多重3"-特异PCR，可攻DNA分子上的多位点变化的鉴定准确快速，简便。应用目前利用ARMS法研发用于临床的试剂盒有：人KRAS基因突变检测试剂盒(Taqman-ARMS法)本试剂盒用于检测大肠癌患者癌组织中KRAS基因的热点突变情况，可定性检测KRAS基因外显子2中第12密码子(G12D(35G＞A)、G12A(35G＞C)、G12V(35G＞T))和13密码子(G13D(38G＞A))的四个热点突变位点。ARMS-PCR法四项耳聋基因检测试剂盒近日，中生北控生物科技股份有限公司分子诊断试剂研发部开发的ARMS-PCR法四项耳聋基因检测试剂盒经中检所检测，顺利通过国家药监部门的审核，获得国家食品药品监督管理局颁发的医疗器械注册证，注册号为：国食药监...