药敏试验简介卢先雷本节课程需要掌握的内容•什么是药敏试验，什么时候需要做药敏试验——即药敏试验的临床指征是什么？•药敏试验方法学——怎么做•药敏试验结果的正确判读与解释——怎么观察•药敏结果的正确报告•药敏试验的室内质量控制药敏试验的概念与适应征•通过模拟体内环境条件，测试分离自病人体内感染部位的病原菌对常用抗生素的敏感性，即抗生素对目标细菌的抑制能力，从而预测抗生素治疗效果的一种体外试验方法。•药敏试验适应征：分离菌是感染菌而不是定植菌或污染菌；常规经验治疗效果不佳或有较高失败风险时；对感染菌的耐药性无法估计时；需要了解微生物耐药性变迁时药敏试验方法学•纸片扩散法•稀释法（MIC法）–肉汤稀释法•常量稀释法•微量稀释法–琼脂稀释法•E-test法药敏试验方法学指南•美国CLSI–M2-A10DiskDiffusion(2009)*–M7-A8MIC(2009)*–M11-A7Anaerobes(2007)–M24-AMycobacteria,Nocardiae,andOtherAerobicActinomycetes–M27-A2FungalMIC(2002)–M44-AFungaDiskDiffusion(2004)–M45-AInfrequentlyIsolated/FastidiousBacteria(2006)*M2,M7updatedevery3years*M2,M7updatedevery3years•其他标准：–法国CASFM标准；梅里埃产品习惯采用的CLSI以外的标准–英国BSAC标准；欧洲应用比较广泛的标准–德国DIN标准……..纸片扩散法•原理–一定药物含量的碟形抗生素纸片贴在涂布一定浓度菌液的琼脂上，过夜培养后抗生素扩散到纸片周围的琼脂中，形成一定浓度区域，越靠近纸片的浓度越高，反之越低；–当低到一定程度（MIC以下）时药物无法抑制细菌的生长，从而形成界限分明的抑菌环–通过抑菌环大小与MIC值高低之间的统计学分布关系，经过回归处理可以求出细菌对某种抗生素的MIC折点范围对应的抑菌环大小值。由此可知，MIC与抑菌环大小之间存在负相关，。试验方法与条件•CLSI推荐培养基：–普通营养要求细菌使用水解酪蛋白琼脂（MHA）平板–肺链使用含5%绵羊血的含血MHA–嗜血杆菌使用HTM培养基–淋球菌使用含1%生长因子（不含L-半胱氨酸）补充剂的GC培养基•平皿大小：最小90mm，通常使用150mm平板•琼脂厚度4±1mm•菌液浓度0.5McF（约1.5×108CFU/ml）•涂布方法：无菌棉签浸透菌液后稍微挤干，棉签与平板呈30°左右的倾角密集左右来回涂布，完成一遍后旋转120°后再涂，如此三次，最后绕边缘一次•纸片之间最佳间距30mm，不得低于25mm•培养温度；35℃；重叠时不超过3个碟子•气体环境：普通细菌大气环境；嗜血杆菌、淋球菌、肺链置CO2环境•培养时间：18小时测量方法•透射光−葡萄球菌利奈唑胺苯唑西林万古霉素−肠球菌万古霉素•反射光–测量其他细菌与药物时•变形杆菌•忽略环内的迁徙生长•测量肉眼可见的明显抑菌区•忽略环边缘的微弱生长环内生长现象大肠药敏，被肠球菌污染大肠药敏，被肠球菌污染铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌耐药亚群耐药亚群特殊处理方法•当受测抑菌环与旁边的融合时，选择完整部分测量•当受测抑菌环部分变形时，选择正常部分测量扩散法药敏影响因素•培养基–pH值7.2-7.4–营养程度（肠球菌能生长）–厚度–抗生素拮抗剂含量（用29212监控）–钙镁离子含量、锌离子含量（用27853氨基糖苷类和亚胺配能结果监控）•菌悬液–浓度高抑菌环缩小–浓度低则扩大•细菌纯度•气体环境–普通细菌放CO2时由于碳酸的影响，药物活性受到影响，形成假敏感或假耐药–苛养菌放普通环境生长不良，导致假敏感•培养时间–粘液性铜绿需48小时•测量方法稀释法（MIC法）•MIC法：分为常量法和微量法常量法：肉汤稀释法、琼脂稀释法微量法：微量肉汤稀释法简化双浓度折点法ATB药敏简化常规浓度分布MIC法BD、德灵药敏动力学计算MIC法VITEK32、VITEK2药敏试验方法与条件•CLSI推荐培养基：–普通营养要求细菌使用补充阳离子MH肉汤–肺链使用含2%冻融马血的MH肉汤–嗜血杆菌使用HTM肉汤–厌氧菌和微需氧菌使用布氏肉汤–淋病奈瑟菌推荐强化GC作琼脂稀释法•菌液浓度（5×104CFU/ml）：–初始菌液0.5McF（约1.5×108CFU/ml）盐水稀释200倍，加入0.1ml菌液到含有0.1ml双倍浓缩的MH肉汤的微孔板中（或预先用标准浓度的MH肉汤稀释...
