www.bioind.comBiologicalIndustriesServesLifeSciencesPage1of5NutriStem®MSCXFMedium间充质干细胞无血清培养基使用说明1.培养基组分产品名称货号规格储存条件NutriStem®MSCXFBasalMedium间充质干细胞无血清基础培养基05-200-1A500ml4°CNutriStem®MSCXFSupplement间充质干细胞无血清营养添加物05-201-1U3ml-20°CNutriStem®MSCXFBasalMedium间充质干细胞无血清基础培养基05-200-1B100ml4°CNutriStem®MSCXFSupplement间充质干细胞无血清营养添加物05-201-1-060.6ml-20°C注意:作为完全的，即用型的培养基，不需要额外的添加物。两种组分不单独销售。2.产品描述NutriStem®MSCXFMedium是无血清、不含异源动物成分(Xeno-free)的人类间充质干细胞培养基，可促进多种来源的人类间充质干细胞的生长，如骨髓（BM-hMSC）、脂肪组织（AT-hMSC）、脐带（UCM-hMSC）。NutriStem®MSCXFMedium可促进人类间充质干细胞的长期生长，同时还能保持多向分化潜能。NutriStem®MSCXFMedium和MSC间充质干细胞促贴壁试剂（货号:05-752-1）共同使用，细胞贴壁及增殖效果更好。3.特点无血清、不含异源动物成分：所有成分都是明确的，且同种来源（人），包括蛋白质；不含抗生素；能够培养不同来源的人类间充质干细胞；维持人类间间充质干细胞的长期生长，保留类纤维原细胞形态；极低的背景分化率；维持间充质干细胞的自我更新及多向分化潜能，可分化为骨细胞、脂肪细胞及软骨细胞。4.hMSCs对NutriStem®MSCXFMedium的适应性若之前使用血清培养法，转换至NutriStem®MSCXFMedium间充质干细胞无血清培养，可能会面临细胞适应的问题，需要逐步适应，并优化培养方案，建议从原代开始使用。注意：如同任何培养体系的转换，在新的培养体系下细胞会损失一部分并需要一定过程适应。www.bioind.comBiologicalIndustriesServesLifeSciencesPage2of55.注意事项和免责声明5.1如果观察培养基中有可见的沉淀物，不能再使用5.2超过标签上的截止使用日期，不得再使用5.3所有组分均应避光保存6.完全即用型培养基的准备冻存的NutriStem®MSCXFSupplement间充质干细胞无血清营养添加物需要在室温或2-8°C解冻，避免重复冻融。完全的NutriStem®MSCXFMedium：将0.6ml的NutriStem®间充质干细胞营养添加物加进100ml的NutriStem®间充质干细胞基础培养基中（同样的，将3ml的NutriStem®间充质干细胞营养添加物加到500ml的NutriStem®间充质干细胞基础培养基中），2-8°C避光保存，混合完全的NutriStem®MSCXFMedium在2-8°C直到14天都是稳定的。7.MSC贴壁试剂（货号:05-752-1）的包被培养皿的准备工作7.1使用无菌的DPBS溶液（货号:02-023-1，不含Ca2+andMg2+），将MSC促贴壁试剂稀释100倍，用移液管轻轻搅拌混合；7.2用稀释过的MSC贴壁试剂涂层培养皿；7.3使用合适的量以涂层培养孔或板，使用量参照表1；7.4轻轻摇动培养皿，用保鲜膜包裹涂层的培养皿，然后在2-8°C孵育过夜；7.5或者在CO2培养箱（36-38°C）至少孵育30分钟；7.6接种前，用DPBS轻轻冲洗培养器皿。表1涂层过程中贴壁试剂建议使用量培养器皿表面积cm2/孔或瓶稀释100倍后的MSC贴壁试剂/孔或瓶96孔板0.30.1ml24孔板1.90.40ml12孔板3.80.8ml6孔板9.42mlT25瓶255.5ml注意：1.长时间用MSC贴壁试剂孵育(至72hr)不会降低细胞贴壁和扩散性能。2.涂层的培养皿需在无菌条件下2-8°C储存，需在一周内使用。www.bioind.comBiologicalIndustriesServesLifeSciencesPage3of58.培养hMSCs8.1复苏冻存的hMSCs8.1.1取5-10mlNutriStem®MSCXFMedium完全培养基，放入50ml的圆锥管中，37°C水浴槽预热；8.1.2将一管冻存的hMSCs直接放在37°C水浴槽快速解冻，并轻微搅拌；8.1.3慢慢将细胞滴加到预热的培养基中；8.1.4常温下，细胞在300-400xg离心4-5分钟；8.1.5除去上清，然后用0.5-1ml的完全培养基重新悬浮细胞；8.1.6进行活细胞计数（如:台盼蓝拒染实验或XTT）；8.1.7加一定量的NutriStem®MSCXFMedium完全培养基；8.1.8将细胞转移到用MSC贴壁试剂包被过的培养皿中，接种密度需要计算（见表2）；8.1.9CO2培养箱孵育(36-38°C)注意：不建议直接离心解冻复苏之后的h...
