毛细管电泳原理及分析策略CEVIP免费

毛细管电泳分离原理及分析策略毛细管电泳分离原理及分析策略CECE分离原理分离原理--与模式有关与模式有关•毛细管区带电泳（毛细管区带电泳（CZECZE））•毛细管胶束电动色谱（毛细管胶束电动色谱（MECC/MCKCMECC/MCKC））•毛细管凝胶电泳（毛细管凝胶电泳（CGECGE））•毛细管等电聚焦（毛细管等电聚焦（cIEFcIEF））•亲和毛细管电泳（亲和毛细管电泳（ACEACE））•毛细管电色谱（毛细管电色谱（CECCEC））第一章毛细管区带电泳第一章毛细管区带电泳样品在电解液中泳动,根据物质的荷/质比差异来进行分离，比值愈大,跑得愈快进样方式进样方式压力进样电动进样浓缩进样毛细管种类毛细管种类•非涂层毛细管（裸管）非涂层毛细管（裸管）•内壁涂层毛细管（涂层管）内壁涂层毛细管（涂层管）非涂层毛细管非涂层毛细管--电渗流的概念电渗流的概念-H+高pH低pH电渗流的特点电渗流的特点EOFEOF-+纯电泳状态纯电泳状态-+EOF电泳电泳++电渗流电渗流0tm(min)电渗流的作用电渗流的作用电渗流的活塞流特点电渗流的活塞流特点•HydrodynamicflowHydrodynamicflow–Parabolic–Resistancetoflowatsurface–Morediffusion/broaderdetectionzone•EOFgivesplugflowEOFgivesplugflow–Minimizesbandbroadening–Narrowsdetectionzone•HydrodynamicflowHydrodynamicflow–Parabolic–Resistancetoflowatsurface–Morediffusion/broaderdetectionzone•EOFgivesplugflowEOFgivesplugflow–Minimizesbandbroadening–Narrowsdetectionzone电渗流的活塞流特点电渗流的活塞流特点电渗流是电渗流是CECE中最大的驱动力来源之中最大的驱动力来源之一一电渗流的正面及负面作用电渗流的正面及负面作用•正面作用正面作用•增加分离速度增加分离速度•使得正、负电荷物质同使得正、负电荷物质同时分离时分离•负面作用负面作用•减少分离时间和分离有减少分离时间和分离有效距离效距离•电渗流的波动极大的影电渗流的波动极大的影响了迁移时间的重复性响了迁移时间的重复性影响电渗流的因素影响电渗流的因素•pHpH值值pHpH越高，电渗流越大越高，电渗流越大•离子强度离子强度离子强度越高，电渗流越小离子强度越高，电渗流越小•缓冲溶液添加剂缓冲溶液添加剂离子型表面活性剂、有机溶剂、环糊精离子型表面活性剂、有机溶剂、环糊精电渗流随电渗流随pHpH的变化情况的变化情况控制电渗流的三个重要手段控制电渗流的三个重要手段1.1.采用涂层毛细管，消除电渗流的影响采用涂层毛细管，消除电渗流的影响2.2.改变改变pHpH，从而调整电渗流的大小。，从而调整电渗流的大小。pH<3pH<3时电渗流很低；当时电渗流很低；当pH>10pH>10以后，电渗流基以后，电渗流基本不增加本不增加3.3.添加剂：有机溶剂可以降低电渗流的大小，添加剂：有机溶剂可以降低电渗流的大小，从而增加分离的有效距离；表面活性剂可以从而增加分离的有效距离；表面活性剂可以彻底改变电渗流的方向和大小，主要是在阴彻底改变电渗流的方向和大小，主要是在阴离子分析时使用离子分析时使用缓冲溶液的影响和选择缓冲溶液的影响和选择•在在CECE中应该根据以下性质来选择缓冲溶液：中应该根据以下性质来选择缓冲溶液：1.1.在所选的在所选的pHpH范围内有较强缓冲能力；范围内有较强缓冲能力；2.2.在检测波长处有低的紫外吸收；在检测波长处有低的紫外吸收；3.3.小的淌度（即大体积、低电荷离子）以降低所产生的小的淌度（即大体积、低电荷离子）以降低所产生的电流。电流。那些被称为生物“优良缓冲液”的，如那些被称为生物“优良缓冲液”的，如Tris,Tris,borate,CAPSborate,CAPS等特别有用，因为这些缓冲溶液中的等特别有用，因为这些缓冲溶液中的离子一般较大，能够在较高浓度下使用而不会产生大离子一般较大，能够在较高浓度下使用而不会产生大的电流，但一个潜在的缺点是这些大的缓冲离子有强的电流，但一个潜在的缺点是这些大的缓冲离子有强的紫外吸收。的紫外吸收。常用的常用的CECE缓冲体系缓冲体系•磷酸钠体系宽缓冲范围磷酸钠体系宽缓冲范围•硼酸钠体系高硼酸钠体系高pHpH范围范围•Tris-HClTris-HCl体系低体系低pHpH范围范围•醋...