云南桑树病菌初步鉴定及其对咪酰胺的敏感性测定答辩人：陈文智答辩人：陈文智指导教师：杜飞指导教师：杜飞20122012年年66月月1212日日园林园艺学院本科论文答辩汇报提纲研究背景结论与讨论研究目的研究内容结果与分析研究背景：在很多蚕区，桑树容易发生桑树叶斑病，影响桑树的生长发育，桑叶老化脱落，造成桑叶减产，叶质下降，蚕儿食下病叶后，吸收不到有利于蚕儿生长发育所需的营养，会降低蚕儿抗病的能力，影响蚕茧的产量和质量。•研究目的：采用咪酰胺不同浓度对桑树病菌的抑制率和EC50研究，为提高桑树的产量和质量提供理论依据。•研究内容：以云南保山、曲靖两地区带有叶斑病的桑叶为材料，采用菌落直径法，对杀菌剂咪酰胺的EC50进行测定。算出咪酰胺对病原菌的敏感性。带病桑叶试验技术路线图植物保护学院何永红老师提供编号为SHB的病原菌病原菌分离病原菌活化病原菌纯化单孢分离鉴定形态鉴定分子鉴定农药测定曲靖、保山、采集新鲜带病桑叶5%NaClo处理常温培养3～5天显微镜下常温培养3～5天菌株编号名称采集地点分离部位病斑形状病斑颜色1保2-2保山叶片斑点状黑褐色2曲4-1-1曲靖枝条斑点状黑褐色3曲6-2-1曲靖叶片条状黑褐色4曲5-1-1曲靖叶片斑点状黑褐色5曲5-1-2曲靖叶片斑点状黑褐色6曲2-2-2曲靖叶片斑点状黑褐色7曲2-1-2曲靖枝条斑点状黑褐色8曲5-2-1曲靖叶片条状黑褐色9曲3-1-1曲靖叶片斑点状黑褐色供试菌株分别从保山、曲靖采样得到。从桑树的叶片和枝条部位分离可得病原菌，病斑部有条状和斑点状，病斑颜色都为黑褐色。表1桑树病菌采集地点、分离部位和病症编号名称正面形态背面形态孢子堆1保2-2粉红色丝状粉红色黑色较少2曲4-1-1白色丝状白色黑色丰富3曲6-2-1米白色有轮纹絮状桔黄色有轮纹黑色丰富4曲5-1-1米白色有轮纹丝状白色黑色丰富5曲5-1-2白色丝状桔黄色有轮纹黑色较少6曲2-2-2白色有轮纹丝状黑黄相间有轮纹黑色丰富7曲2-1-2黑白相间有轮纹絮状黑黄相间有轮纹黑色丰富8曲5-2-1黑白相间有轮纹丝状黑黄相间黑色丰富9曲3-1-1黑白相间有轮纹丝状黑黄相间有轮纹黑色丰富表29种菌株在PDA平板上的形态特征ABA、菌株在PDA平板上的正面形态B、菌株在PDA平板上的背面形态图1菌株在PDA平板上的形态序号采样地点孢子形状孢子颜色孢子长（um）孢子宽（um）1保山孢子很小椭圆形近无色，成堆时绿色1.64～2.300.84～1.382曲靖纺锤形、长椭圆形或卵形无色长：9～142.5～43、8、9曲靖棒状中间4色胞同色，有尾和须。黑褐色本长：11.83～15.11须长：5.43～9.84尾长：2.02～4.932.30～3.634曲靖长卵形或倒棍棒形榄褐色孢子痕长：14～48孢子长：33～147孢子痕宽：6～13；孢子宽：9～335曲靖镰刀形或梭性无色9.55～15.191.89～2.696曲靖长卵形、椭圆形或纺锤形深蓝色或深紫色16～254.5～67曲靖小型孢子椭圆形或卵形，大孢子椭圆形至长卵形无色小孢型子5.3～10.5大型孢子7.5～17小型孢子2.8～5大型孢子2.5～5.5表3桑树病害孢子形态观察结果表明（表3和图2）1号菌株初步鉴定为亚木霉（Trichodermakoningii），2号菌株初步鉴定为桑幹枯病（Phomopsissp）,3、8、9号菌株初步鉴定为拟盘多毛孢（Pestalotiopsis），5号菌株初步鉴定为禾赤霉菌（Gibberellazeae），4号菌株初步鉴定为甘蓝长尾交链孢霉（Alternariabrassicae），5号菌株初步鉴定为禾赤霉菌（Gibberellazeae），6号菌株初步鉴定为桑牙枯病（Fusariumcerealis），7号菌株初步鉴定为蔓枯病菌（Didymellabryoniae）。A、3号菌株孢子形态B、1号菌株孢子形态C、5号菌株孢子形态ACBACB形态学鉴定结果图2桑树病害孢子形态分子鉴定结果：本试验中分离的9个菌株与从GeneBank比对结果表明，保2-2、曲4-1-1、曲6-2-1、曲5-1-1、曲5-1-2、曲2-2-2、曲2-1-2、曲5-2-1、曲3-1-1号菌株是亚木霉、桑干枯菌、细极链格孢、甘蓝长尾交链孢霉、禾赤霉菌、桑牙枯菌、蔓枯病菌、细极链格孢、天竺葵链格孢。菌种AccessionMaxidentDescriptionGenebank比对结果保2-2AF218790.199%Trichodermakoningii亚木霉曲4-1-1AB302247.199%Phomopsissp桑干枯菌曲6-2-1HM467832.199%Alternariatenuissima细极链格孢曲5-1-1JF439449.199%Alternariabrassicae甘蓝长...
