第二章(1、2)植物组织培养实验室的组成、仪器设备及基本操作VIP专享VIP免费

第二章植物组织培养实验室的组成、仪器设备及基本操作一、植物组织培养实验室的结构及设计要求：完整的植物组织培养室通常包括洗涤室、化学实验室、接种室、培养室、细胞学实验室等部分。可以根据实际需要和条件进行设计。但从功能上至少包括准备室（化学实验室）、接种室以及培养室三部分，并且按顺序排列。在化学实验室与接种室之间应留有缓冲空间。第一节实验室结构、仪器设备及操作技术（一）准备室（化学实验室）：1.主要功能：用于培养器皿的清洗、干燥、培养基的配制、分装和灭菌、试管苗的出瓶及整理等工作。2.主要仪器设备及用品：药品柜、实验台、水槽、超声波洗涤仪、凉干架、干燥箱、各种玻璃器皿（烧杯、量筒、容量瓶、试剂瓶、三角瓶等）、蒸馏水制造装置。天平、移液器、pH计、水浴锅、微波炉、电炉、磁力搅拌器、蠕动泵、及培养基分装用品等、高压灭菌锅、冰箱。（二）接种室（无菌操作室）：1、功能：接种材料的灭菌、接种以及培养物的继代转接等。接种室要求保持洁净，与化学实验室之间应设置缓冲室。2、仪器设备及用品：超净工作台、紫外灯、小推车、搁架、磁盘、接种工具（各种镊子、解剖刀、手术剪、普通剪刀接种针、酒精灯、手持喷雾器、细菌过滤器等）等。（三）培养室：1、功能：主要用于植物材料的培养。要求室内洁净并能保持一定的温度、光照以及湿度，以促进植物材料的生长和分化。2、仪器设备及用品：培养架及灯管、摇床（振荡器）、空调、自动定时器、加湿及除湿器、光照培养箱等。（四）细胞学实验室：1、功能：主要用于培养材料的显微观察及照相等。2、仪式设备及用品：体视显微镜、普通显微镜、倒置显微镜、荧光显微镜、配套显微照相装置、普通相机或数码相机、切片机及配套制片及染色用品等。体视显微镜用途：放大倍数5~80倍主要用于植物形态分化的观察、茎尖的切取。普通光学显微镜用途：用于植物切片观察，确定植物的发育进程，如：不定芽、不定胚的分化过程以及其它器官组织的分化等。倒置显微镜用途：主要用于细胞、原生质体的细胞分裂和细胞团形成的观察。（一）洗涤：1.普通器皿：采用洗衣粉、洗洁精等中性洗涤剂洗涤。2.难清洗器皿及移液管等：用水清洗后再用重铬酸钾洗液浸泡，最后清水冲洗，或用超声波仪清洗。重铬酸钾洗液的配制方法：43g重铬酸钾溶于1000ml蒸馏水中，将浓硫酸缓慢倒入重铬酸钾溶液中，浓度比例为1：1。二、实验室基本操作：1、器具灭菌：培养皿、解剖刀、镊子等用品。（1）干热灭菌：铝箔包好后，放于恒温干燥箱内，150℃保温2小时，成本较高。（2）高压蒸汽灭菌：高压蒸汽灭菌锅内120℃15－20分钟。（3）灼烧灭菌：接种时，解剖刀及镊子等浸入95％乙醇，然后取出在酒精灯火焰上灼烧杀菌。（二）灭菌：灭菌是指用物理和化学方法杀死物体表面和内部的所有微生物（包括芽胞），使之呈无菌状态。经过灭菌的物品称“无菌物品”。2、培养基灭菌：采用高压蒸汽灭菌。120℃15－20分钟。培养基体积越大，灭菌时间越长。高温高压灭菌对培养基成分的影响：a.pH值普遍下降。b.产生混浊或沉淀，这主要是由于一些离子发生化学反应而产生混浊或沉淀。例如Ca+2与PO4-3化合，就会产生磷酸钙沉淀。c.不少培养基颜色加深。d.体积和浓度有所变化。e.营养成分有时受到破坏。3、不耐高温材料的灭菌：采用过滤灭菌，如IAA、ZT、天然有机添加物等。4、外植体的表面灭菌：采用70－75％乙醇（10-30秒）、有效氯1％的次氯酸钠（5-30分钟）、0.1－0.2%的氯化汞（2-15分钟）等杀菌剂中加入几滴吐温－20或80（Tween－20或80）效果较好。（三）无菌操作：1、保持接种室的无污染环境，定期熏蒸或喷雾处理。接种前打开超净工作台及紫外灯照射20-30分钟，关闭紫外等灯后使气体散出后开始操作。2、保持超净工作台的洁净：接种前用70％乙醇擦拭台面或用喷壶喷雾，操作前，将手和手臂用70％乙醇消毒，所需试验用品用乙醇擦拭后放入超净工作台。3、点燃酒精灯，进行操作，接种材料前后，灼烧瓶口，工具要灼烧彻底，防止交叉污染。4、保持培养室的洁净，发现污染及时挑出，以减少污染源。5、操作中穿工作服、戴口罩、工作帽，出入接种室换拖鞋以保持接种室的...