1.2基因工程的基本操作程序【学习目标】1．理解基因工程的原理2．简述基因工程基本步骤的几个步骤【学习重点】基因工程的基本操作步骤【基础回扣】1、转录：场所：_________________模板：_________________原料：_______________________酶：原则：结果：_______________________2、翻译：场所：_________________模板：_________________原料：_______________________酶：原则：结果：_______________________氨基酸有_________种，决定氨基酸的密码子共有_________种，一种tRNA只能携带___种氨基酸,一种氨基酸可以由______种tRNA携带。mRNA……U－U－A－G－A－U－A－C－U……这mRNA上有密码子________个，与其相应的反密码子为_______________________________________。3、DNA场所：_________________模板：_________________原料：_______________________复制酶：原则：结果：_______________________4、，默写出中心法则【预习导学】1、目的基因获取（1）获取方法主要有两种：①获得原核细胞的目的基因可采取，获取真核细胞的目的基因一般是。②人工合成目的基因的常用方法有和。(2)PCR扩增目的基因含义：。①目的：获取大量的目的基因②原理：③过程：第一步：加热至90～95℃DNA解链为；第二步：冷却到55～60℃，与两条单链DNA结合；第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始进行的合成。特点：数目以形式扩增2、基因表达载体的构建（1）重组DNA分子的组成：除了目的基因外，还必须有、、。标记基因的的作用：鉴定中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞出来。（2）构建方法：同种限制酶分别切割和，再用把两者连接。3、转化：是目的基因进入受体细胞内，在受体细胞内维持和的过程。（2）常用转化方法：①将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是，其次还有基因枪法和。②将目的基因导入动物细胞：受体细胞一般选择，最常用的方法是。③将目的基因导入微生物细胞：Ca2＋处理法。首先将细胞用处理，成为。接下来将载体DNA分子与受体细胞在中混合，完成转化过程。4、①首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用技术。②其次还要检测目的基因是否转录出，方法是采用RNA分子杂交技术。③最后检测目的基因是否翻译成，方法是采用杂交技术。④上述三步检测为分子水平的检测，还可以进行个体生物学水平的鉴定，如抗虫或抗病的鉴定等。基因工程的意义：能够打破生物种属的界限，即，在分子水平上改变生物的遗传特性。【疑难解析】1、核心操作基因表达载体构建的注意事项①载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构②用到的工具酶：既用到限制酶切割载体，又用到DNA连接酶将目的基因和载体拼接，两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键③启动子、终止子对于目的基因表达必不可少④目的基因不能单独进入受体细胞，必需以表达载体的方式携带进去。2、DNA复制与PCR技术的比较PCR技术DNA复制相同点原则碱基互不配对原料四种脱氧核苷酸条件模板、能量、酶不同点解旋方式DNA在高温下变性解旋解旋酶催化场所体外复制细胞核内酶热稳定的DNA聚合酶细胞核内的DNA聚合酶结果大量的DNA片段整个DNA分子3、①目的基因检测，利用DNA分子杂交技术，提取受体细胞中的DNA，然后高温解成单链，再与同位素标记的DNA探针杂交看是否有杂交带；②mRNA检测，利用RNA分子杂交技术，目的基因DNA一条链（作探针）与受体细胞中提取的mRNA杂交看是否有杂交带；③抗原－抗体杂交所用到的抗体是用表达出的蛋白质注射动物进行免疫，产生相应的抗体，并提取出而来的。例题巩固：1、获得目的基因的方法有（）A．构建基因文库从基因文库中获取B．人工合成C．PCR技术大量获得D．利用农杆菌转化法获得2、在基因工程中，把选出的目的基因（共100个脱氧核苷酸对，其中腺嘌呤脱氧核苷酸是46个）放入DNA扩增仪中扩增2代，那么，在扩增仪中应放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数是()A.54个B.162个C.378个D.756个3、.哪项不是基因表达载体的组成部分()A.启动子B.终止密码C.标记基因D.目的基因4、在基因诊...
