稀土离子荧光及其在免疫分析和核酸探针中的应用_陈泮藻VIP免费

《免疫学杂志》����年第�卷第�期���稀土离子荧光及其在免疫分析和核酸探针中的应用陈伴藻史华红‘李振甲�解放军总医院基础所生化室北京�������稀土离子特别是衫������铺������械���’��摘������能发出强的荧光。由于激光技术的发展,自六十年代起,人们对稀土离子的荧光进行了深入的研究,弄清了稀土离子荧光机理、荧光特点和影响因素。近年来,国内外学者把稀土离子的荧光应用到生物学和医学的研究上,为稀土的应用提供了广阔的前景。一、稀土离子的荧光特点游离的稀土离子的荧光是相当微弱的。当稀土离子与有机配位体�如�一二酮类,芳香拨酸类�形成配合物时,产生分子内能量传递�‘�,使稀土离子的荧光强度显著增强。当加入斓、乍�、馆、或忆等离子时,产生分子间能量传递〔,·’〕,使��”‘离子和����离子的荧光增强�一�个数量级。荧光光谱分为两部分�激发光谱和发射光谱。普通物质的荧光光谱������位移较小。如荧光素的������位移为����。通常,激发光谱和发射光谱有部分重叠,互相影响严重,而且干扰因素多,荧光寿命短�小于�����,易碎灭。稀土离子的荧光光谱具有较大的������位移,发射光谱和激发光谱不会相互重叠,例如,��甲一�����的最大激发波长为�����,最大发射波长为�����,其������位移达������发射光谱峰范围相当窄�小于�����,特异性很强�荧光寿命为�一���。娜,甚至更长,比普通的荧光寿命高几个数量级。检测时,采用适当的时间延缓,可非常显著地降低来自散射光、样品的本底荧光的干扰。此外,不同的稀土离子,最大发射光波长不同�,荧光寿命也不同。可根据这两个特点,选择适当的延缓测量时间,配以不同的滤光片,能很精确地测量混合物中不同稀土离子的含量。二、在免疫分析中的应用放射免疫分析法是目前最常用的方法。其灵敏度高,特异性强,但有放射性危害,受半衰期限制,所以人们致力于研究非同位素标记法。酶标记法较为安全,但酶不稳定,致使检测灵敏度低,可检测的标准曲线范围窄。普通荧光标记法受本底荧光干扰大,荧光易碎灭。稀土离子荧光具有独特的优点,用它作为标记示踪物,再配以时间分辨荧光测量仪,能显著提高分析灵敏度,标准曲线范围宽,而且无放射性危害,标记技术容易掌握,标记物稳定性好。��解离增强法用双功能试剂把���十离子鳌合到免疫样品上�抗原、抗体或亲和素�,当免疫反应完成后,用增强溶液把����离子解离下来,组成新的鳌合物并增强其荧光强度。为了提高检测的灵敏度,常常利用生物素一链亲和素�������一�������������的放大作用�此法的最大特点是双功能试剂只起赘合作用,不能使����离子的荧光增强。因需外加增强溶液,若操作不当,易污染样品,影响测定结果。但这个方法应用相当普遍,灵敏度也较高��丫��一’‘��,重复性好。��直接浏量荧光度法鉴于解离增强法样品易受污染,人们设法避免加入增强溶液。广州中山大学化学系博士生���《免疫学杂志》���年第�卷第�期������十离子的标记法���通过双功能鳌合剂��,�卜双�氯化苯酚磺酸盐�一�,�仆菲锣琳������标记到抗原或抗体上,当抗原与抗体产生特异性的免疫反应,达到动态平衡以后,再加入适当的����离子,与免疫复合物中的��!∀形成新的荧光鳌合物,直接测量其荧光。引入生物素一链亲和素体系能提高检测灵敏度������。整个过程不用外加增强溶液,操作非常方便,目前国外已制成药摧圣�������离子标记法〔�〕�用双功能鳌合剂二乙三胺五乙酸一对氨基水杨酸���!�����标记到抗原、抗体。当免疫反应后,再加入适当的��,�离子,测量其荧光,而无须预先制备����标记物,简化了操作步骤,但灵敏度有待提高。上述两种方法的主要特点是�双功能试剂既起鳌和作用,又起传递能量作用。当免疫反应完成后才加入稀土离子,避免样品的污染间题。��共发光法一些不发光的稀土离子�如��’�、�,�、����、��’�等�能使���‘、����离子的荧光大大增强。例如�“�离子能使����离子荧光增强���倍...