���国外医学临床生物化学与检验学分册该综述审校彩祀广货陈蛋白质的镇标记技术第二军医大学三六九研究室摘要�蛋白质的���十标记是��一���法的关健技术之一。本文综合论述了蟹合剂及其用量、抗原和杭体的标记方法、标记率的计算、标记物的使用和保存等问题。八十年代初期发展起来的时间分辨荧光免疫分析���一���法�’一剐,其特异性、测量范围、检测速度和标记物的稳定性均优于其他非放射性免疫分析法,国内外许多作者已系统论述了其原理、特点、成就和发展前景�‘一“�。制备符合要求的��“十标记物是该法的关键技术之一。基于������公司创立的解离增强翎系荧光免疫分析�������系统较加拿大推出的�������固相分析系统成熟,目前已有近�种试剂盒和�种型号的测量仪器投放市场,国内大多数学者也仅开展此项研究和应用,因而本文着重论述�����系统的��十标记技术、方法和实际工作中应注意的有关问题。�“盆合荆��一��法的示踪剂不是荧光素,而是稀土元素��、��、��等金属离子【“�。它们不能直接与蛋白质联接,需要一个具有双功能基团、溶解度好和稳定性高的鳌合剂起联接作用,一端鳌合���十,一端同蛋白质的氨基结合。常用鳌合剂有�异硫氰酸苯基一����〔�一。�、异硫氰酸苯基一����【‘。一‘��、重氮苯基一�����’�、二乙三胺五乙酸������‘��及其环醉��������‘��、氨基苯基一四氮杂环十二烷四乙酸�’�】、氨基苯基一�����‘’�和������‘��等。它们鳌合����能力很强,鳌合效率高且非常稳定。但在低�条件下,����又可以完全从配体上解离下来,为下一步被另一种鳌合剂鳌合创造了条件。从理论上讲,一个鳌合剂分子只能赘合一个��十,而一个蛋白质分子却可以结合几个乃至几十个鳌合剂分子。因此,实际应用时,赘合剂�������十�������或���即可,鳌合剂�一�����与蛋白质分子比,要大于��“�����一至二个数量级,即数十倍至数百倍�见表��,使其充分过量,游离部分用柱层析或透析法去除。、�表�部分蛋白质���干标记所用彗合剂量鳌合剂蛋白质倍数文献�异硫氰酸苯基一����异硫氰酸苯基一����、重氮苯基一���抗��������抗��������抗�������兔抗地高辛���抗�������羊抗兔������������������������������������年第��卷第�期���丫标记方法同其它免疫分析技术一样,标记物的质量直接影响��一��法的建立。因此在整个标记过程中,应严格控制反应条件和时间,保证抗原或抗体的免疫活性没有较大损失。对于抗体,标记方法分为鳌合剂先鳌合��卜再联接蛋白质和先联接蛋白再赘合���十两种,国内有人【“�称其为一步法和二步法。而全抗原与抗体的标记方法相同,半抗原则需要预先加以修饰,再按上述方法进行。标记反应基本原理如下���一二、‘�,哎,,�蛋‘反�������刊‘夕叹�产“一、�一一一人、�专妞�一、,一乞一。砂、匡选址,一�一洲毛喝沙酬常用标记方法有�一、先鳌合��“�标记抗体法鳌合剂在较高��条件下鳌合��十很容易。因此按一定比例将����加至鳌合剂溶液中,摇匀,反应后即得鳌合剂一���。���������等〔‘��采用此法标记了抗胎儿血红蛋白���������������,��������取��������碳酸钠缓冲液�������配制的抗�������,加入异硫氰酸苯基一�����一���,使其同��克分子比成为��,混匀,室温过夜。加入�����贝�一��柱��������,������������书���������洗脱,合并峰管,测量���浓度,计算标记率,每��加人������,一��℃保存备用。二、后鳌合�砂�标记抗体法例如,�����等��’�取�������,加至纯化的抗黄曲霉毒素��������!抗体液中,混合���,调节��至�,室温反应��移入透析袋,勃�����柠檬酸盐缓冲液������透析,以去除游离����,取出,加至柠檬酸盐缓冲液配制的...
