药敏质量控制VIP专享VIP免费

复旦大学附属华山医院抗生素研究所叶信予deb_ye@126.com药敏试验质量控制的目的保证细菌的鉴定和药敏结果在临床诊断和治疗中的准确性和可靠性满足疾病诊断和治疗的要求，实事求是地反映检验标本的客观存在与国际资料具有可比性室间质控（externalqualitycontrol）是由外部机构控制实验室质量的客观过程。内容：病原菌鉴定、药物敏感试验目的：比较差异、改进措施、确定培训需求、客观证据、支持实验室认可、增加实验室信心、监督工具国内外权威机构：○国内：卫生部临床检验中心、上海临床检验中心等○国际：WHO/CDC─抗菌药物敏感性试验质控英国─环球微生物学质控美国─CAP质控室内质控（internalqualitycontrol)保证检验质量的高水平实验室工作人员的素质微生物检验的标准操作（细菌鉴定、药敏试验）标本取材、登记、采集检测仪器的性能培养基、试剂质量、保质期标准菌株药物敏感性试验测定抗菌药物在体外对病原微生物有无抑制作用的方法世界卫生组织推荐：○常规的药敏方法为纸片琼脂扩散法（K-B纸片琼脂扩散法）○科研方面主要为稀释法，包括液体稀释法（试管法、微量法）和琼脂稀释法○分子生物学方法、酶试验K-B纸片琼脂扩散法是一种定性试验：S、I、R操作简便，常规工作中最常应用影响因素多存在一定局限性稀释法肉汤稀释法•常量（大量）肉汤稀释法（试管法）•微量肉汤稀释法琼脂稀释法是一种定量方法，结果精确操作繁琐，要求严格E-test法定量方法操作简便，容易观察价格昂贵分子生物学法测遗传耐药机制•如PCR检测葡萄球菌mecA基因等•其他还有核酸杂交等方法酶试验测生化耐药机制。○如碘量法、酸量法、Nitrocefin法等测β-内酰胺酶。○ESBLs、AmpC酶检测等。β-内酰胺酶试验阳性：○可快速预报嗜血杆菌、淋病奈瑟菌、卡他莫拉氏菌对青霉素、氨苄青和羟氨苄青霉素耐药。○葡萄球菌对青霉素及氨基、羧基和酰脲基青霉素类药物的耐药性。纸片琼脂扩散法如果仅仅基于抑菌环的有无，而不考虑抑菌环的大小，则无法检测抗菌药物的敏感性。只有将检测方法和抑菌环直径测量标准化的方法相结合进行试验，才能获得可信的结果。必须采用CLSI推荐的标准操作方法进行试验，才能获得可重复的结果。纸片琼脂扩散法的影响因素技术人员的操作培养基药敏纸片接种物制备试验操作孵育条件、温度和时间药敏结果读取质控菌株技术人员应经过训练能进行检验能熟练使用仪器有评价检验结果有效性的能力细心、用心、责任心培养基•水解酪蛋白琼脂（M-H琼脂）：最适用于常规药敏测试非苛养菌的培养基。•原因：–药敏试验显示了可接受的批间重复性。–其含有影响磺胺、甲氧苄啶和四环素敏感性试验结果的抑制剂浓度低。–能使绝大多数非苛养菌生长良好。–已积累了用此培养基进行的敏感性测试的大量数据和经验。培养基苛养菌：需加入营养添加剂5%脱纤维羊血MH琼脂含SR158生长因子的HTM培养基GC琼脂基质+1%规定的生长添加剂培养基pH值：室温条件下7.2-7.4之间。因此必须在凝固之后检测检测方法：浸渍足够多的琼脂完全掩盖pH机电极的尖端少量的琼脂在烧杯中凝固在pH机电极的尖端的周围使用表面电极培养基pH值小于7.2，变化会显著改变一些药物的抑菌环大小氨基糖苷类、克林霉素、大环内酯类及喹诺酮类抑菌环变小青霉素、四环素抑菌环变大pH值大于7.4，会出现相反的结果培养基胸苷或胸腺嘧啶：过量可以逆转磺胺类和甲氧苄啶的抑制作用，从而产生更小、更不清楚的抑菌环，甚至没有抑菌环的出现，可能导致错误的耐药报告粪肠球菌ATCC29212，用复方新诺明纸片测试，满意结果为清晰、鲜明的抑菌环，直径≥20mm培养基二价阳离子：钙和镁离子：影响氨基糖苷类和四环素对铜绿假单胞菌的药敏结果。○含量过高，抑菌环变小○含量过低，抑菌环变大钙离子含量的变化也会影响达托霉素的药敏结果○含量过低，抑菌环变小○含量过高，抑菌环变大过量的锌离子可使碳青霉烯类抑菌环变小培养基平板厚度一定要标准，达到4mm厚度9cm平板倾注琼脂量25-30ml；15cm平板需60ml左右...