复旦大学附属华山医院抗生素研究所叶信予deb_ye@126.com药敏试验质量控制的目的保证细菌的鉴定和药敏结果在临床诊断和治疗中的准确性和可靠性满足疾病诊断和治疗的要求，实事求是地反映检验标本的客观存在与国际资料具有可比性室间质控（externalqualitycontrol）是由外部机构控制实验室质量的客观过程。内容：病原菌鉴定、药物敏感试验目的：比较差异、改进措施、确定培训需求、客观证据、支持实验室认可、增加实验室信心、监督工具国内外权威机构：○国内：卫生部临床检验中心、上海临床检验中心等○国际：WHO/CDC─抗菌药物敏感性试验质控英国─环球微生物学质控美国─CAP质控室内质控（internalqualitycontrol)保证检验质量的高水平实验室工作人员的素质微生物检验的标准操作（细菌鉴定、药敏试验）标本取材、登记、采集检测仪器的性能培养基、试剂质量、保质期标准菌株药物敏感性试验测定抗菌药物在体外对病原微生物有无抑制作用的方法世界卫生组织推荐：○常规的药敏方法为纸片琼脂扩散法（K-B纸片琼脂扩散法）○科研方面主要为稀释法，包括液体稀释法（试管法、微量法）和琼脂稀释法○分子生物学方法、酶试验K-B纸片琼脂扩散法是一种定性试验：S、I、R操作简便，常规工作中最常应用影响因素多存在一定局限性稀释法肉汤稀释法•常量（大量）肉汤稀释法（试管法）•微量肉汤稀释法琼脂稀释法是一种定量方法，结果精确操作繁琐，要求严格E-test法定量方法操作简便，容易观察价格昂贵分子生物学法测遗传耐药机制•如PCR检测葡萄球菌mecA基因等•其他还有核酸杂交等方法酶试验测生化耐药机制。○如碘量法、酸量法、Nitrocefin法等测β-内酰胺酶。○ESBLs、AmpC酶检测等。β-内酰胺酶试验阳性：○可快速预报嗜血杆菌、淋病奈瑟菌、卡他莫拉氏菌对青霉素、氨苄青和羟氨苄青霉素耐药。○葡萄球菌对青霉素及氨基、羧基和酰脲基青霉素类药物的耐药性。纸片琼脂扩散法如果仅仅基于抑菌环的有无，而不考虑抑菌环的大小，则无法检测抗菌药物的敏感性。只有将检测方法和抑菌环直径测量标准化的方法相结合进行试验，才能获得可信的结果。必须采用CLSI推荐的标准操作方法进行试验，才能获得可重复的结果。纸片琼脂扩散法的影响因素技术人员的操作培养基药敏纸片接种物制备试验操作孵育条件、温度和时间药敏结果读取质控菌株技术人员应经过训练能进行检验能熟练使用仪器有评价检验结果有效性的能力细心、用心、责任心培养基•水解酪蛋白琼脂（M-H琼脂）：最适用于常规药敏测试非苛养菌的培养基。•原因：–药敏试验显示了可接受的批间重复性。–其含有影响磺胺、甲氧苄啶和四环素敏感性试验结果的抑制剂浓度低。–能使绝大多数非苛养菌生长良好。–已积累了用此培养基进行的敏感性测试的大量数据和经验。培养基苛养菌：需加入营养添加剂5%脱纤维羊血MH琼脂含SR158生长因子的HTM培养基GC琼脂基质+1%规定的生长添加剂培养基pH值：室温条件下7.2-7.4之间。因此必须在凝固之后检测检测方法：浸渍足够多的琼脂完全掩盖pH机电极的尖端少量的琼脂在烧杯中凝固在pH机电极的尖端的周围使用表面电极培养基pH值小于7.2，变化会显著改变一些药物的抑菌环大小氨基糖苷类、克林霉素、大环内酯类及喹诺酮类抑菌环变小青霉素、四环素抑菌环变大pH值大于7.4，会出现相反的结果培养基胸苷或胸腺嘧啶：过量可以逆转磺胺类和甲氧苄啶的抑制作用，从而产生更小、更不清楚的抑菌环，甚至没有抑菌环的出现，可能导致错误的耐药报告粪肠球菌ATCC29212，用复方新诺明纸片测试，满意结果为清晰、鲜明的抑菌环，直径≥20mm培养基二价阳离子：钙和镁离子：影响氨基糖苷类和四环素对铜绿假单胞菌的药敏结果。○含量过高，抑菌环变小○含量过低，抑菌环变大钙离子含量的变化也会影响达托霉素的药敏结果○含量过低，抑菌环变小○含量过高，抑菌环变大过量的锌离子可使碳青霉烯类抑菌环变小培养基平板厚度一定要标准，达到4mm厚度9cm平板倾注琼脂量25-30ml；15cm平板需60ml左右...
