猪流行性腹泻的实验室诊断方法VIP专享VIP免费

主题策划FEATURE54猪业科学SWINEINDUSTRYSCIENCE2010年第12期猪流行性腹泻的实验室诊断方法李思银，杨亮宇，杨玉艾*（云南农业大学动物科学技术学院，云南昆明650201）猪流行性腹泻（porcineepidemicdiarrhea，PED）是由猪流行性腹泻病毒（porcineepidemicdiarrheavirus，PEDV）引起的一种猪的高度接触性肠道传染病，病猪以严重腹泻、呕吐和脱水为主要临床特征[1]，俗称冬季拉稀病。本病于1977年由比利时的Pensaert首先发现，并从病料中分离出一株不同于猪传染性胃肠炎病毒（transmissiblegastroenteritisvirusofswine，TGEV）的病毒，将其命名为类冠状病毒（CVL）CV777株。随后英国、匈牙利、西德、加拿大、日本等国相继报道有该病的发生。1982年国际病毒分类委员会将该病毒归类为冠状病毒属。我国于1980年首次分离得到PEDV，以后许多地区均报道有该病的发生。据有关部门对我国26个省、市、自治区1987-1989年疫病普查的不完全统计，在36种猪病总死亡率中该病的死亡率占1.74％。近年来，资助项目：云南省科技厅项目（2008CD129）作者简介：李思银（1987～），女，湖南人，硕士研究生，临床兽医学专业。通讯作者：杨玉艾（1978～），女，陕西人，博士，硕士生导师，临床兽医学专业。摘要：猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒引起的猪的一种以呕吐、腹泻和食欲下降为基本特征的高度接触性肠道传染病。其流行病学和临床症状与猪传染性胃肠炎很类似，无法通过临床症状、流行病学和病理变化进行确诊，必须借助于实验室检查方法才能确诊。本文对目前常用的猪流行性腹泻病毒的实验室检查方法、病毒的分离鉴定、微量血清中和试验、免疫电镜、免疫荧光、ELISA、RT-PCR进行了阐述，旨在为该病的诊断及防控提供理论依据。关键词：猪；流行性腹泻；实验室；诊断该病的流行区域有不断扩大的趋势，成为严重危害养猪业的传染病之一。1病原学PEDV为冠状病毒科冠状病毒属的成员，有囊膜，囊膜上有花瓣状纤突，长12～24nm，由核心向四周放射，其间距较大且排列规则，呈皇冠状。该病毒平均直径为130nm（95～190nm），在外界条件下呈球形，而在粪便中常呈现多种形态。目前发现，该病毒只有一个血清型，不能凝集人、兔、猪、鼠、犬、马、羊、牛的红细胞。该病毒对外界抵抗力弱，对乙醚、氯仿敏感，一般消毒药可将其杀灭，60℃30min，可使其失去感染力，但在4℃，pH5.0～9.0、37℃，pH6.5～7.5或50℃条件下相对稳定。2流行病学该病仅发生于猪，各种年龄的猪均可感染发病，哺乳仔猪、架子猪和育肥猪的发病率可达100％，母猪的发病率在15％～90％，哺乳仔猪尤为严重，病死率平均为50％，成年母猪发病率10%～90％。病猪和带毒猪是主要传染源，被含有病毒的粪便污染的运输车辆、饲养员的鞋子或其他带毒的动物，均可成为本病的传播媒介，主要通过消化道传播，也有经呼吸道传播的报道。PEDV可在猪群中持续存在，并能在猪体内产生一定的免疫记忆。各种年龄的猪对该病均易感，本病多发生于冬季，12月份至翌年2月份为本病的高发期，夏季也可发生。PEDV可单一感染，也可与TGEV混合感染，但以混合感染较为常见。近年来，临床上出现了PEDV与猪圆环病毒（porcinecircovirus，PCV）混合感染的报道，但发病原因尚不明确。3临床症状PED常以暴发性腹泻的形式发生在非免疫断奶仔猪或各种年龄的猪，主要临诊症状与TGE相似，多表现为水样腹泻，粪稀如水，呈灰黄色或灰色，或于进食或吮乳后伴发呕吐，但程度较轻，传播稍慢。病猪具体临床主题策划FEATURE552010年第12期SWINEINDUSTRYSCIENCE猪业科学min离心后，通过电镜观察到了典型的病毒粒子形成的免疫复合物，并建立了具有3次筛选作用改良的IEM法。该方法简便、直观、快速、定性准确，但该方法要求有价格高昂的电镜设备，而且电镜检查一般需3～7d才能出报告，不适用于大规模临床诊断。5.4免疫荧光法试验研究证明，用直接免疫荧光法（fluorescentantibodytechnique，FAT）检查病料中的猪流行性腹泻抗原是可靠的特异性诊断方法，目前应用最为广泛。取病猪小肠作冰冻切片或小肠黏膜抹片，风干后丙酮固定，加荧光抗体染色，充分水洗，封盖镜检，1～2h即可得出结果。为了与猪传染性...