流式细胞仪原理及应用(HIV)VIP专享VIP免费

碧迪医疗器械（上海）有限公司碧迪医疗器械（上海）有限公司上海市静安嘉里中心上海市静安嘉里中心33座座1010楼楼李苏辉李苏辉流式细胞仪流式细胞仪原理及仪器维护保养原理及仪器维护保养白细胞的组成白细胞的组成白细胞的组成及其分化抗原白细胞的组成及其分化抗原白细胞在分化成熟过程中，不同的发育阶段和不同亚类的白细胞出现或白细胞在分化成熟过程中，不同的发育阶段和不同亚类的白细胞出现或消失的表面标记，这是区分白细胞的重要标志。消失的表面标记，这是区分白细胞的重要标志。19861986年世界卫生组织年世界卫生组织命名委员会建议应用命名委员会建议应用CDCD系列来统一命名白细胞分化抗原系列来统一命名白细胞分化抗原白细胞（CD45)淋巴细胞单核细胞(CD14/15)粒细胞(CD15)Bcell（CD19等）NKcell（CD16/56)Tcell(CD3)嗜酸性粒细胞嗜碱性粒细胞中性粒细胞巨噬细胞Thcell(CD4)Tccell(CD8)SHA-LFR032-20080930-4N13EforJerel细胞毒性T淋巴细胞;分泌穿孔素、IFN、、TNF等。特点：MHC-1类分子限制、直接接触、反复杀伤自然杀伤细胞（NK)：抗体依赖细胞介导的细胞毒作用、淋巴因子介导细胞毒作用、抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用补体系统的活化（经典、凝集素、替代途径）。作用（溶胞作用、吞噬条理作用、趋化性、炎症反应等）中和抗原：形成免疫复合物，被吞噬细胞清除（条理作用）、毒素中和作用、感染中和作用体液免疫和细胞免疫的作用体液免疫和细胞免疫的作用淋巴因子依赖的细胞毒作用免疫应答的过程及免疫应答的过程及ThTh细胞的作用细胞的作用免疫应答：细胞免疫体液免疫Th细胞作用：Th1分泌IL-2、INF等，前者可诱导Th、Tc分裂增值；Th2分泌IL-4、IL-5,可使B细胞活化，产生抗体B细胞完全活化需要Th帮助流式细胞仪原理流式细胞仪原理•流式细胞术流式细胞术(Flowcytometry)(Flowcytometry)▪对于处在流动状态的细胞或生物颗粒对于处在流动状态的细胞或生物颗粒同时进行多参数的快速的分析和定量同时进行多参数的快速的分析和定量的技术的技术TTTTCCHHCD3CD3CD3CD3CD8CD8CD4CD4流式细胞仪检测原理及在流式细胞仪检测原理及在TT细胞分析中应用细胞分析中应用AnalyzeAnalyzeIncubateIncubate激发光源与荧光标记物激发光源与荧光标记物FACSCaliburFACSCalibur流式细胞仪仪器结构流式细胞仪仪器结构•液流系统液流系统•光学系统光学系统•激光光源激光光源•光收集系统光收集系统•电子系统电子系统•光电转换光电转换•数据处理系统数据处理系统•软件系统软件系统液流系统液流系统--鞘液鞘液流式细胞仪原理流式细胞仪原理InjectorTip荧光信号及前向角、侧向角散射光荧光信号及前向角、侧向角散射光聚焦的激光光束鞘液光学系统光学系统•激光激光(Laser,lightamplification(Laser,lightamplificationbystimulatedemissionofbystimulatedemissionofradiation)radiation)是一种相干光源，它能提供单是一种相干光源，它能提供单一波长、高强度及稳定性高的光照一波长、高强度及稳定性高的光照•激光波长激光波长:488nm,635nm:488nm,635nm检测信号散射光信号FSC:前向角散射光SSC:侧向角散射光(90度散射光)荧光信号荧光染料光学滤片检测信号FALSSensorLaser前向角散射光信号前向角散射光信号散射光信号散射光信号——前向角散射光信号前向角散射光信号(FSC)(FSC)散射光信号散射光信号——前向角散射光信号前向角散射光信号(FSC)(FSC)•FSC----FFSC----Forwardorward((AAngelngelLLight)ight)SScattercatter在激光束正前方的检测器在激光束正前方的检测器,,为前向散射光检测器为前向散射光检测器•FSCFSC的强度与细胞或其他颗粒的大小的强度与细胞或其他颗粒的大小,,形状及形状及opticalhomogeneityopticalhomogeneity有关有关•FSCFSC用于检测细胞或其他粒子的表面属性用于检测细胞或其他粒子的表面属性如如::大小大小FALSSensor90LSSensorLaser侧向角散射光信号侧向角散射光信号侧向角散射光信号侧向角散射光信号(SSC)(SSC)侧向角散射光信号侧向角散射光信号(SSC)(SSC)•SSC-SSSC-Sideide((AAngelngelLLight)ight)SScattercatter与激光束垂直方向的检测器为侧向检测器与激光...