重要虫生真菌莱氏野村菌芽生孢子的形态发生[1]VIP免费

Mycosystema菌物学报15May2010,29(3):340-346jwxt@im.ac.cnISSN1672-6472CN11-5180Q©2010InstituteofMicrobiology,CAS,allrightsreserved.基金项目：“863”计划（No.2006AA10A212）；国家自然科学基金（No.30972368）；教育部高等学校博士点专项科研基金（No.200503644001）；安徽省高校省级自然科学研究重点项目（No.TD200708）*Correspondingauthor.E-mail:zzli@ahau.edu.cn收稿日期:2009-09-22,接受日期:2010-01-04重要虫生真菌莱氏野村菌芽生孢子的形态发生蒋婧婧1马忠友1,2李佳丽1刘振邦1黄勃1李增智1*1安徽农业大学微生物防治省重点实验室合肥2300362安徽科技学院生物系蚌埠233100摘要：经对比，萨氏麦芽糖-酵母浸粉培养液（SMY）较适合制备莱氏野村菌Nomuraearileyi芽生孢子。以菌株Nr09接种该培养基，在130r/min、25℃全光照下震荡培养，观察芽生孢子在不同时期发育的形态变化。结果表明，分生孢子萌发产生芽管；24h萌发率为42%，36h时达84%。芽管迅速伸长形成菌丝。在48h前芽生孢子通过菌丝顶端及分枝末端缢缩的方式形成，后期则主要通过芽生孢子继续出芽的方式大量形成，78h芽生孢子数量达到最大值。芽生孢子的形成方式可为一端、两端或多端芽殖。芽生孢子的形成过程可分为5个阶段：（I）分生孢子膨大期；（II）芽管萌发期；（III）芽管延长期；（IV）芽生孢子形成初期；（V）芽生孢子指数生长期。30h后培养液中有少量草酸钙结晶出现并逐渐增多。到84h时有31%的芽生孢子细胞内液泡聚集增大，表明芽生孢子已开始进入衰老阶段。使用指数生长期制备的Nr09芽生孢子进行几丁质酶基因转化，转化效率达79个转化子/μgDNA。关键词：分生孢子，萌发，芽管，草酸钙结晶，液泡，基因转化MorphogenesisofblastosporesofNomuraearileyi,animportantentomogenousfungusJIANGJing-Jing1MAZhong-You1,2LIJia-Li1LIUZhen-Bang1HUANGBo1LIZeng-Zhi1*1AnhuiProvincialKeyLaboratoryofMicrobialControl,AnhuiAgriculturalUniversity,Hefei230036,China2DepartmentofBiology,AnhuiScienceandTechnologyCollege,Bengbu233100,ChinaAbstract:Sabouraud-Maltose-Yeastextractliquidmedium(SMY)wasoptimalforpreparationoftheblastosporesoftheentomopathogenicfungusNomuraearileyi,andthemediumwasusedformorphogenesisstudyoftheNr09strainofthefungusbyincubationat130r/min,25℃,andilluminationfor24h.TheresultshowedthattheconidiaofN.rileyiproducedgermtubesanddevelopedintohyphae,withgerminationratioat42%in24hafterinoculationand84%in36h.Blastosporesformedbythemodeofconstrictionofhyphalterminalswithin48h,andlargelymultipliedbysuccessivebuddingofthespores,reachingthemaximumin78h.Vol.29No.3341菌物学报Buddingpatternscouldbeunipolar,bipolar,ormultipolar.Insummary,fivedevelopmentalstagescouldbedefined:(I)conidiumswelling,(II)emergenceofgermtubes,(III)elongationofgermtubes,(IV)initiationofblastospores,and(V)exponentialgrowthofblastospores.Somecrystalsofcalciumoxalatewereproducedbythefungusafterincubationin30h.By84h,bigvacuolesdevelopedinthecellsof31%blastospores,suggestingthebeginningofsenescence.TheblastosporesofNr09preparedatexponentialphasewereusedfortransformationofanexogenouschitinasegene,Bbchit1,withatransformationfrequencyupto79transformantsperμgDNA.Keywords:conidium,germination,germtube,calciumoxalatecrystal,vacuole,genetransformation虫生真菌是农林生态系中昆虫的重要致死因子，有时还能形成流行病，对于维持生态平衡具有重要作用。有些种类已被开发为真菌杀虫剂，对于防治农林害虫起着重要作用。然而，这些真菌多具有杀虫效果慢、受环境影响较大和效果不稳定等缺点，从而影响其市场份额。当前人们已开始通过基因工程技术将内源或外源毒力基因或抗性基因导入这些真菌，以加快杀虫速度，提高应用的稳定性。已有研究表明，引入蝎毒基因AaIT构建的金龟子绿僵菌Metarhiziumanisopliae(Metschn.)Soroki...