细胞增殖活性及原位检测VIP免费

细胞增殖活性原位检测技术及应用重庆医科大学病理教研室叶秀峰细胞周期（CellCycle)•一、细胞周期概述•概念：细胞周期是指连续分裂的细胞从上一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂完成所经历的整个过程。•主要事件：遗传信息载体DNA复制，通过有丝分裂将两份拷贝DNA平均分配到两个子代细胞中•分期：分为4个时期.即G1SG2M期(一)Gl期(Gapphase)是指从有丝分裂完成到DNA复制之前这一阶段，包括．RNAs及蛋白的合成，所以又称复制前期或合成前期。这一时期细胞主要活动是为DNA的复制和蛋白质合成作准备，主要特点为：•(1)各种细胞的G1期持续时间变化很大。这可能与细胞在此期增加质量有关。因此，连续增殖细胞的增殖率是受G1期细胞的平均时间长度控制的，各种细胞群体之间细胞周期的差异取决于G1期的长短。•(2)此期发生了与DNA合成有关的事件，主要是RNA和蛋白质的合成。•(3)RNA合成发生于G1早期，同时RNA聚合酶水平也迅速增高。•(4)G1早期合成结构蛋白和酶蛋白等，G1后期合成与DNA复制有关的酶类，如胸苷激酶、脱氧核苷酸激酶等，其中DNA聚合酶活性在G1末期至S初期增高最快。•(5)蛋白质磷酸化增加。组蛋白磷酸化增加使染色体解旋，以利于DNA复制；非组蛋白磷酸化增加可能与基因的活化有关。•(6)染色体状态由凝集转变为解凝集，为DNA合成创造条件。•(7)细胞膜转运功能增强。•(二)S期(synthesisphase)•即DNA合成期或复制期，S期主要是DNA合成(自我复制)、遗传物质从二倍体(2n)到四倍体(4n)的整个过程。其中主要的生物化学改变是遗传物质的复制，即．DNA的复制及组蛋白、非组蛋白等染色体蛋白的合成。•由于每一条染色体复制成两条染色单体，在S期末，DNA含量增加一倍。DNA的准确复制保证了分裂后子细胞遗传物质的平均分配。DNA合成的同时，形成新的染色质的另一重要成分组蛋白的合成也同时进行。•(三)G2期(Gap2phase)•指DNA复制完成到有丝分裂开始这段时间，这段时间内细胞有2套二倍体染色体，所以又称复制后期或合成后期。DNA复制完成后，细胞进入G2期。处于此期的细胞DNA合成已终止，但仍然进行着RNA和一定的蛋白合成，为细胞有丝分裂作准备。•(四)M期(mitosisphase)•即有丝分裂期，细胞在M期进行分裂。M期又分为前期、前中期、中期、后期、末期。M期的末期一结束，就形成两个新的子细胞，一次细胞周期即告结束，细胞就进入下一个细胞周期的G1期。•细胞有丝分裂是一个复杂的过程，必须在DNA复制完成后，细胞才能进行有丝分裂。此期细胞呈球形，不很牢固地附在它生长的基质上。染色体在此期凝聚后分开，移向细胞两端，解聚并再形成两个完整的核，最后通过细胞质分裂而结束M期。•有丝分裂是一个核改组的连续过程，根据形态学特征可分为5个阶段：•前期(prophase)•前中期(earlymetaphase)•中期(metaphase)•后期(anphase)•末期(telophase)1．前期这一期主要发生染色体凝集、分裂极的确定、核仁解体及核膜消失。2.前中期主要变化是纺锤体的形成和染色体排列在赤道面上形成赤道板。3．中期从染色体排列到赤道面上到两条染色单体(子染色体)开始趋向两极，这段时期称为中期。中期的染色体浓缩成典型形态，在赤道面上形成赤道板。4．后期后期是姐妹染色单体分开并移向两极的时期，当子染色体到达两极时，此期结束。染色单体的分开通常由着丝点开始，即两个着丝点先分开，然后两个染色单体的臂逐渐分开，完全分开后就向两极移动。5．末期从子染色体到达两极后开始到形成两个子细胞这段时期称为末期，包括子核的形成与胞质分裂两个过程。二、细胞周期的控制点细胞周期能够顺利地发生、发展和完成，取决于三个重要的控制点(controlpoint)，即决定G1期发生的G1控制点，决定S期发生的S控制点和决定M期发生的M控制点。每一个控制点控制着细胞周期一定阶段的开始，但只有在细胞周期前一个阶段彻底完成以后才能发生。(一)G1控制点:•在G1期，哺乳动物细胞的趋向有3种可能性：一些细胞进入S期，通过G2期及有丝分裂期，即进入增殖周期；一些细胞离开细胞周期，处于静止期，又称G0期，它们在一定的条件刺激下可重新进入增殖周期；还有一些细胞向分化方向发展，使细胞的功能向专一化，而...