乙肝六项操作及检验结果的解释VIP专享VIP免费

乙肝六项的操作、注意事项及检验结果的解释乙肝六项操作HBSAg(双抗体夹心法）•原理•在微孔条上预包被，被纯化的乙肝表面抗体，配以酶标记抗体（HBsAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗原（HBsAg）。乙肝六项操作HBSAg(双抗体夹心法）•操作步骤•一.准备•1.1平衡：将试剂盒各组分别取出，平衡至室温（18-25℃），–1.2配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），–浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按25倍稀释后使用。–1.3编号：将微孔条固定于支架，按序编号。乙肝六项操作HBSAg(双抗体夹心法)–二.HBSAg操作–2.1加样：分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各75l于相应孔中。–2.2温育：置37℃温育60分钟。–2.3加酶：不用洗涤，分别在每孔中加入酶标记抗体50l，轻轻混匀。–2.4温育：置37℃温育30分钟，室温平衡5分钟。–2.5洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。–2.6显色：每孔加入底物A、B各50l，轻拍混匀，置37℃暗处30分钟。–2.7终止：每孔加终止液50l，混匀。•三.HBSAg测定•用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。乙肝六项操作HBSAg(双抗体夹心法)•结果判断与分析–临界值（C.O.）的计算：Cutoff临界值=阴性对照孔OD值N×2.1，阴性对照OD均值大于0.05时按实际OD值计算，小于0.05时以0.05计算。–结果判定：样品OD值S/C.O>=1者为HBsAg阳性•样品OD值S/C.O<1者为HBsAg阴性乙肝六项操作HBeAb检测（ELISA)竞争法一.试剂准备同上二.HBeAb操作加样：分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50l于相应孔中。加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50l，轻轻混匀。温育：置37℃温育30分钟，室温平衡5分钟。洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。显色：每孔加入底物A、B各50l，轻拍混匀，置37℃暗处15分钟。终止：每孔加终止液50l，混匀。三.HBeAb测定用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。乙肝六项操作HBeAb检测（ELISA)竞争法•四.结果判断与分析•临界值（C.O.）的计算：•临界值＝（阴性对照孔OD值N+阳性对照孔OD值P）×0.5，•结果判定：样品OD值S/C.O<=1者为HBeAb阳性•样品OD值S/C.O>1者为HBeAb阴性•注意：加底物显色，显色的强弱与待测标本中HBeAb的含量成反比。乙肝六项操作HBCAb测定（竞争法）•原理•在微孔条上预包被，被纯化乙肝核心抗原（HBcAg），配以酶标记抗体（HbcAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用竞争抑制法原理检测人血清（或血浆）中乙肝核心抗体（HBcAb）。乙肝六项操作HBCAb测定（竞争法）•试剂准备同上•加样：每测定孔加入50l样品。对照孔中加入阴、阳性对照血清各50l。作为临床诊断依据，必须将原倍血清样品按1：30稀释后再检验，稀释液应采用生理盐水；（作为流行病学调查依据，使用原倍血清检验）。•加酶：每孔加入酶标记抗体50l，轻拍混匀。•育温：置37℃温育30分钟，室温平衡5分钟。•洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。•显色：每孔加入底物A、B各50l，轻拍混匀，置37℃暗处30分钟。•终止：每孔加终止液50l，混匀。•测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。•结果判断与分析•临界值（C.O.）的计算：•临界值＝阴性对照孔OD值N×0.5（未稀释临界值＝阴性对照孔OD值N×0.3）•结果判定：样品OD值S/C.O<=1者为HBcAb阳性•样品OD值S/C.O>1者为HBcAb阴性•注意：加底物显色，显色的强弱与待测标本中HBCAb的含量成反比。乙肝六项操作HBCAb-lgM(捕获法）•测定原理•采用兔抗人HbcAg-IgM包被固相载体反应板，加入待测标本，同时加入HbcAg-HRP，当标本中存在HbcAb时，该HbcAb-IgM与包被HbcAg结合并与酶结合形成HBcAg-HbcAb-HBcAg-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。...