PNH-阵发性睡眠性血红蛋白尿的流式细胞术检测VIP免费

李智伟PNH(paroxysmalnocturnalhemoglobinuria)是一种罕见的获得性克隆造血干细胞疾病。但近年来有增多趋势。我国北方多于南方。半数以上发生在20-40岁青壮年。男性多于女性，与遗传及种族无关。本病起病隐袭缓慢，呈慢性过程，以贫血、出血为首发症状者较多，以血红蛋白尿起病者较少。血红蛋白尿睡眠有关，早晨较重，下午较轻尿液外观为酱油或红葡萄酒样;伴乏力、胸骨后及腰腹疼痛、发热等原因因为补体作用最适宜的pH是6.8～7.O，而睡眠时呼吸中枢敏感性降低，酸性代谢产物积聚研究历史Strubing第一次报道PNHHam和Dingle证明了PNH患者的红细胞在血清酸化条件下，易发生溶血，这就是现在普遍使用的Ham实验1983年证实PNH患者GPI合成异常1993年pig-a基因突变流式细胞术原理：X染色体上PIG-A（造血干细胞经获得性体细胞基因）突变导致糖化肌醇磷脂(GPI)锚合成障碍导致由GPI锚接在细胞膜上的一组膜蛋白丢失，包括CD16、CD55、CD59等GPI锚连接蛋白补体调接蛋白衰变加速因子(DAF或CD55)、膜攻击复合物抑制因子(MACIF或MIRL或CD59)、补体C8结合蛋白(HRF或C8bp)、膜辅助蛋白(MCP)。粘附分子淋巴细胞功能相关抗原-3(LFA-3或CD58)、Blast-1/CD48、CD67、CD66。GPI锚连接蛋白酶类红细胞乙酰胆碱脂酶(AchE)、中性粒细胞碱性磷酶酸酶(NAP)、5’外核酸酶(CD73)。受体类中性粒细胞III型Fc受体(FcRIIIb或CD16)、单核细胞分化抗原(CD14)、尿激酶型纤溶酶原激活物受体(u-PAR)。血型抗原CD55携带的Comer抗原、AchE携带的Yt抗原。1型细胞CD59完全阳性补体激活途径C1C1C2,C4C4b2b(C3转化酶）C3C3bP（备解素）PC3bBbC3bB(C5转化酶）C4b2b3b或PC3bBbC8C9C6C7C5C5bC5b678C5b-9(MAC)CD59替代途径经典途径CD55Ag-Ab分析1.红系及粒系FSC/SSC设门报告标本中CD55、CD59阴性比例做20~30份正常人血样划定阳性区（Ⅰ区）范围同型阴性对照界定Ⅲ区范围，中间的区域即为Ⅱ区。根据CD59可以将PNH细胞分为3型1型细胞CD59完全阳性正常细胞2型细胞CD59部分阳性补体中度敏感细胞3型细胞CD59完全阴性补体敏感细胞CD55和CD59同时部分或完全缺失是PNH的典型表现，单GPI缺失不能确诊。CD59重要性大于CD55单CD55缺乏时并不因此改变红细胞对补体的敏感性而造成溶血CD59的缺失会增加补体的敏感性临床上以CD59缺失作为诊断标准是一个趋势。解决了一切以补体溶血为基础的实验诊断方法在诊断PNH的不确定性意义其它细胞的PNH检测PNH患者的红细胞、粒细胞、单核细胞及淋巴细胞上GPI锚连膜蛋白部分或全部丧失。粒细胞>单核细胞>淋巴细胞>红细胞骨髓PNH克隆出现比外周血早，网织红细胞略早于红细胞其它细胞的PNH检测应用FSC/SSC设门分析时会有许多脱颗粒的中性粒细胞，这时只使用物理特征无法准确设定粒细胞门了，这时必须使用系列标志/SSC设门:CD15，CD33。CD64设门，分析单核CD14,CD55,CD59，PNH病人检测GPI缺乏的血小板不容易分辨不能只根据淋巴细胞上GPI相关蛋白的表达来诊断。与其他实验比较1.酸溶血试验(Ham试验)患者红细胞与含5%盐酸的正常同型血清混合，pH6.4，37℃孵育2小时，溶血明显。本试验特异性高，敏感性差。2.蛇毒因子溶血试验蛇毒因子能通过补体交替途径，使补体敏感的红细胞发生溶血。本试验特异性强，敏感性优于酸溶血试验。3.热溶血试验和蔗糖溶血试验因特异性差，常作为筛选方法。具有PNH克隆的血液病检测粒细胞GPI锚连蛋白表达病种检测例数缺失例数(%)AA11525(22%)MDS399(23%)并发现MDS有PNH表达者ATG（人胸腺细胞免疫球蛋白）治疗有效(AnInternMed1999，131:401)PNH和AA关系相当密切，可以相互转化且并存AA→PNH较多(15%)，PNH→AA少20%`~30%PNH可伴骨髓再障AA(ATG治疗后)→PNH10~31%AA-PNH综合征16.5%(我国)50%AA外周血或骨髓可检出PNH克隆AA→PNH生存率要高于PNH→AAMDS-RA如捡出PNH克隆者预后好，且ATG(人胸腺细胞免疫球蛋白)治疗有效。PNH对AA和MDS的“自然治疗”，而“AA救了PNH”。PNH克隆见于淋巴增殖性疾病检测病种例数NHL87HD55红细胞CD55/CD59CLL49缺失检出率9.2%ALL22HCL4(HematolJ2001，2:33)PNH克隆见于浆细胞病检测红细胞CD55/CD59缺...