不同剂量6_羟基多巴胺注射大鼠单侧前脑内侧束后对中脑多巴胺能神经元损伤作用的观察VIP免费

第4卷第3期解剖科学进展Vol.4No.31998年PROGRESSOFANATOMICALSCIENCES1998不同剂量6-羟基多巴胺注射大鼠单侧前脑内侧束后对中脑多巴胺能神经元损伤作用的观察贺江海郭畹华(中山医科大学组胚神经科学研究室广州510089)摘要将不同剂量的6-羟基多巴胺(6-OHDA)注入大鼠一侧黑质(SN)头端的前脑内侧束(MFB),47天后用酪氨酸羟化酶(TH)免疫细胞化学染色法,观察旋转鼠整个SN和腹侧被盖区(VTA)不同切面上DA神经元的损伤程度,结果发现:损伤侧SN和VTA的TH阳性神经元数在所有观察水平上均有明显下降,并从前囟后5.1mm开始呈现6-OHDA剂量依赖性。而下降率(与健侧相比)为SN致密部(snc)>网状部和外侧部(snr+snl)>VTA。同时还发现,snc的TH阳性细胞在黑质两端分布比率较高,而VTA的相应细胞在黑质中部分布率较高。另外,在健侧前囟后4.8mm处出现非6-OHDA剂量依赖性的TH阳性神经元计数明显增加的现象。本文的结果提示:6-OHDA对中脑DA神经元的总体损伤程度取决于多种因素,如6-OHDA剂量、神经元对6-OHDA的敏感度以及敏感神经元的分布等。同时健侧中脑组织对邻侧发生的损伤并非毫无反应,一些交叉投射的纤维可能起着传递损伤信息的作用。关键词6-羟基多巴胺;帕金森病;黑质;腹侧被盖区;多巴胺向单侧中脑注射6-羟基多巴胺(6-hy-droxydopamine,6-OHDA)制作帕金森病(Parkinson'sdisease,PD)旋转动物模型的方法自Ungerstedt70年代初创立以来已在PD研究工作中发挥了重要的作用,目前仍是研究PD的主要方法之一。由于研究内容的扩大,制作这种旋转模型的具体操作也有所改进或发展,更多的性能参数需要了解。目前,虽已有不少研究[1～4]涉及到6-OHDA注射剂量、注射位点不同时的中脑黑质(SN)和腹侧被盖区(VTA)多巴胺(DA)神经元的损伤程度问题,但对在前脑内侧束(medialforebrainbun-dle,MFB)注射位点上,同时观察不同剂量6-OHDA对中脑腹侧整个SN和VTA损伤作用的工作目前尚缺报道,而本文特在此方面进行了研究。在观察6-OHDA注射侧DA神经元损伤情况的同时,我们还分析了非注射侧相应神经元的变化。我们的观察结果将对进一步了解6-OHDA对中脑DA神经元的损伤作用以及PD旋转模型的实验分析工作提供参考。1材料与方法1.1实验材料及试剂纯种Sprague-Dawley(SD)大鼠58只,体重180～260g(中山医科大学动物中心提供),雌雄不限。6-OHDA-HCl(SigmaChemicalCo.)用含0.02%抗败血酸的无菌生理盐水配制成浓度为4�g/�l和2�g/�l的溶液。Apomorphine(SigmaChemicalCO.)。酪氨酸羟化酶(tyrosinehydroxy-lase,TH)单克隆抗体(SigmaChemicalCo.)。ABCkit(VectorLaboratories)。1.26-OHDA立体定位注射动物分成7组。前5组注射不同剂量的6-OHDA,即10�g组(8只)、8�g组(16只)、6�g组(9只)、4�g组(8只)、2�g组(10只);后二组为对照组(4只,注射含0.02%抗败血酸的无菌生理盐水)和正常鼠(3只,不进行手术)。戊巴比妥钠(45mg/kg)麻醉后,将鼠固定于立体定位仪上,齿棒在耳中线下2.4mm,暴露头颅,在左侧钻孔,然后用10�l微量注射器注射6-OHDA,注射速度0.5�l/min,注射后留针3～5′然后缓慢退针。钻孔和注射的坐标(以200g鼠为标准,其它体重的鼠作相应调整)为前后(AP),-4.4mm(相对前囟);内外(ML),1.3mm(在左侧);背腹(DV),8.5mm(从颅骨表面标起),根据包新民,舒斯云的鼠脑图谱[5]。对于10�g、8�g和6�g6-OHDA的注射,用浓度为4�g/�l的6-OHDA溶液,对4�g、2�g的则用2�g/�l的6-OHDA。1.3旋转行为测定手术后一周,测定旋转行为。用阿普吗啡(apomorphine)0.25mg/kg腹腔注射,测30′,以后每10天测一次,再次4次(共47天),手动计数器计数。每一个360°旋转计数一次。1.4酪氨酸羟化酶(TH)免疫化学分析对于发生旋转的鼠,每组中选出4或5只最接近平均转速的鼠进行TH免疫化学分析。在过量戊巴比妥钠麻醉下,动物经升主动脉灌注70～90ml生理盐水,然后是250ml冰冻温度的多聚甲醛(Sigma,4%的PB液,pH7.4,0.1M),后固定12h,30%蔗糖PB液(pH7.4,0.1M)脱水至组织块下沉。冰冻冠状切片,厚37.5�m。从前囟后4.5mm到6.0mm,每隔8张切片取一张片(共6张)置于已明胶涂层过的载玻片上。先用阻断血清(blockingserum)(含2%正常马血清、0.3%Tri-tonX-100、0.01MPBS,pH7.4)预孵育1h,然后TH单抗(Sigm...