年河北大学学报自然科学版第期蛋白酶水解酪蛋白透明圈初筛方法的条件探索与应用效应’杨天波《生物系提要本文报导在中性蛋白酶产生菌菌种选育的初筛方法中,有关培养基的选择对透明圈的影响酶液透明圈及菌落透明圈直径大小与酶活力的相关性初筛方法的应用效应等方面的初步结果。前一」一详在蛋白酶菌种选育过程中,对其产酶性能的测定,是采用福林法测定蛋白酶活力,即利用蛋白酶分解酪素,生成含酚基氨基酸的呈色反应来表示蛋白酶的活力。采用福林法测定蛋白酶活力,程序复杂,在筛选大量单株的过程中,其中个别理想变异株出现的机率甚低,如果均采用福林法一一测定,将必然造成大量的人力物力消耗。因此,最好事先进行一次初筛,淘汰大量负变株,然后再用福林法进行复筛,则可节省大量工作量。目前蛋白酶菌种选育的初筛方法,是利用蛋白酶水解酪素,从而在酪素琼脂培养基上形成透明圈的方法,以透明圈直径大小,相应判断其酶活力的高低。但是,该法在曾应用的过程中,透明圈直径与酶活力之间的正相关性,受到某些因素的很大干扰,因而给初筛工作造成极大困难。到目前为止,这种初筛方法尚不能有效地应用于选育工作。为此,我们在中性蛋白酶产生菌菌种的辐射诱变的选育过程中,对初筛方法进行了初步探索。材料和方法一菌种中性蛋白酶产生菌,二培养条件培养基肉汤培养基牛肉膏由天津酶制剂厂提供。蛋白陈】本文年月日收到。天津酶制剂厂李志新、苏威等同志参加了此项工作,我校生物系届毕业生高明真、李红红、李艳参加了实验工作,夭津技术物理所异乃贤等同志提供了电子静电加速器辐照,谨致感谢。。固体加琼脂“灭菌分钟酪素培养基一号酪素牛肉膏。蛋白陈。葡萄糖。于琼脂灭菌分钟二号,酪素琼脂磷酸缓冲液配制灭菌分钟,牛肉膏蛋白陈琼脂蒸馏水配制了灭菌分钟。将以上与培养基分别灭菌,再以,等量混合倒入平皿。产抱子培养基酵母膏蛋白陈。葡萄糖,‘·琼脂一灭菌分钟摇并发酵培养基豆并粉玉米粉教皮甘薯粉自然自来水配制灭菌分钟培养条件肉汤斜面培养温箱培养,℃,小时。酪素平板培养温箱培养,℃。酶液透明圈一小时观察。菌落透明圈小时观察。摇并发酵培养三角瓶,装摇并培养基。由斜面菌种接入一环菌体,℃摇床培养小时。摇床频率次分,振幅。三试验方法。酶液透明圈试验用酪素培养基二号倒平皿,将摇瓶发酵过沪,用沪纸片法测定透明圈。每平皿可放入一个待测样品及对照。置温箱℃培养一小时进行观察。为了精确观察酶液中含酶量与透明圈直径大小的相关性,将酶液浓度稀释倍、倍、倍进行培养观察,方法同上。菌落透明圈试验用酪素培养基二号,按混合,倒入平皿,取径电子束及紫外线辐射诱变的菌液。放入二号培养基平皿,涂匀。℃温箱培养小时,观察透明圈。挑选并测量菌落透明圈直径,被选单株转斜面培养。再经摇瓶培养℃一小时后,按福林法测定酶活力。分析透明圈直径与酶活力间的相关性。飞为了进‘步了解水解酪自蛋透明圈的影响因素,对于培养基的选择对透明圈形成的影响,以及最适观察时间等方面进行了探讨。结果与讨论一酶液透明圈的试验结果与分析。培养基对透明圈的影响将酪素平板培养基的,调至、。、、。在不同培养基上观察透明圈的结果培养基上,透明圈不清晰,周围呈现白色环带,影响透明圈直径测量。培养基上,透明圈周围无白色环带,清晰可见一培养基上,透明圈模糊不清。试验结果,以培养基为最理想。。酶液中含酶量与透明圈直径的相关性为了观察酶液中含酶量对产生透明圈的相关性,将酶液稀释成不同倍数,观察其产生透明圈的效应。表酶液不同稀释倍数与透明圈直径的相关性液原一丈刃一一一酶液稀释倍数一妙毗如而、一侮友落犷号号号号号号浇之注澡⋯三注阵一浇︵级忍那侧更霉卿‘一一一一一,‘一一」呻一一」一一酶液稀释倍数图含酶量与透明圈直径的相关性由以上结果看出,将酶液稀释成不同倍数后,即在酶液中酶活力逐减的情祝下,透明圈直径也相应地逐步减小。试验结果表明,酶活力与透明圈直径呈正相关。此外,从表一的纵向数据来看,当酶液处于高浓度时,不同酶液之间,透明圈直径无明显差异。但经稀释以后,不同酶液所产生的透明圈,则随酶活「高低而出现了相应的正相关现象。例如表中指出,号酶液酶活单位与号酶液酶活单位,在原液时...
