出口食品中霍乱弧菌出口食品中霍乱弧菌检验方法检验方法MethodforthedeterminationMethodforthedeterminationofvibriocholeraeinfoodfofvibriocholeraeinfoodforexportorexport主题内容与适应范围主题内容与适应范围本标准规定了出口食品中霍乱弧菌的检本标准规定了出口食品中霍乱弧菌的检验方法。验方法。本标准适用于出口水产品及其他食品的本标准适用于出口水产品及其他食品的检验。检验。试样的制备及保存试样的制备及保存试样制备试样制备从混合样品中取出代表性样品，将可食从混合样品中取出代表性样品，将可食部分（去除贝壳）充分混匀。用四分法缩部分（去除贝壳）充分混匀。用四分法缩分出不小于分出不小于500g500g作为试样，装入灭菌容器作为试样，装入灭菌容器内，加封后表明标记。内，加封后表明标记。试样保存试样保存冷冻样品于冷冻样品于-18℃-18℃保存保存冷藏样品于冷藏样品于+4℃+4℃保存，保存，24h24h内检验。内检验。设备和材料设备和材料均质器均质器8000r/min—10000r/min,8000r/min—10000r/min,附附500m500mll均质杯。均质杯。恒温培养箱：恒温培养箱：30℃—60℃30℃—60℃。。显微镜显微镜试管架试管架微生物实验室通常用玻璃器皿、移液管、微生物实验室通常用玻璃器皿、移液管、培养皿等。培养皿等。培养基和试剂培养基和试剂碱性蛋白胨水（碱性蛋白胨水（APWAPW））TCBSTCBS琼脂琼脂三糖铁琼脂（三糖铁琼脂（TSITSI））双糖铁琼脂双糖铁琼脂(KIA)(KIA)T1N1T1N1琼脂琼脂精氨酸葡萄糖斜面琼脂精氨酸葡萄糖斜面琼脂(A(AGS)GS)葡萄糖肉汤葡萄糖肉汤(HLGB)(HLGB)赖氨酸脱羧酶肉汤赖氨酸脱羧酶肉汤(Moell(Moeller)er)MR-VPMR-VP肉汤肉汤ONPGONPG胨水胨水AndradeAndrade氏糖类肉汤氏糖类肉汤氧化酶试剂氧化酶试剂粘丝试剂溶液粘丝试剂溶液革兰氏染色液革兰氏染色液5%5%红细胞生理盐水红细胞生理盐水5050单位多粘菌素单位多粘菌素BB纸片纸片10μg10μg和和150μgO/129150μgO/129纸纸片片霍乱弧菌诊断血清（霍乱弧菌诊断血清（O1O1群群及及O139O139群）群）检验步骤检验步骤鉴定检验食品中霍乱弧菌的方法共鉴定检验食品中霍乱弧菌的方法共分为四步：分为四步：增菌增菌分离分离初步鉴定初步鉴定确认试验确认试验血清学凝集试验血清学凝集试验自分离培养基上挑取可疑菌落与自分离培养基上挑取可疑菌落与O1O1群及群及O139O139群霍乱弧菌诊断血清作玻璃片凝集群霍乱弧菌诊断血清作玻璃片凝集试验。如可疑菌落在诊断血清中很快出现试验。如可疑菌落在诊断血清中很快出现肉眼可见的明显凝集，在生理盐水中不凝肉眼可见的明显凝集，在生理盐水中不凝集者判为阳性。集者判为阳性。O1O1群多价血清阳性的霍乱弧菌可进一步群多价血清阳性的霍乱弧菌可进一步用小川型、稻叶型的单价抗血清分型。用小川型、稻叶型的单价抗血清分型。与与O1O1群或群或O139O139群霍乱弧菌诊断血清及生群霍乱弧菌诊断血清及生理盐水均不凝集者为非理盐水均不凝集者为非O1O1群霍乱弧菌。群霍乱弧菌。与与O1O1群霍乱弧菌多价血清或群霍乱弧菌多价血清或O139O139群霍乱群霍乱弧菌诊断血清及生理盐水均凝集的，可用弧菌诊断血清及生理盐水均凝集的，可用胰胨水大豆琼脂或脑心浸液琼脂传代，在胰胨水大豆琼脂或脑心浸液琼脂传代，在进行凝集试验。进行凝集试验。对玻片凝集反应不典型的菌株应作试管凝对玻片凝集反应不典型的菌株应作试管凝集试验。集试验。古典型与埃尔托型古典型与埃尔托型霍乱弧菌的鉴别霍乱弧菌的鉴别常用的鉴别方法主要有三种：常用的鉴别方法主要有三种：多粘菌素多粘菌素BB敏感试验敏感试验溶血试验溶血试验加试剂观察结果加试剂观察结果埃尔托型埃尔托型V-PV-P试验试验报告结果报告结果霍乱弧菌的检出，可依据以下性状霍乱弧菌的检出，可依据以下性状报告：报告：革兰氏染色阴性，无芽胞或弯曲杆菌；革兰氏染色阴性，无芽胞或弯曲杆菌；TSITSI：斜面产酸：斜面产酸//底层产酸，不产气，不底层产酸，不产气，不产硫化氢（产硫化氢（H2SH2S）；）；Hugh-LeifsonHugh-Leifson试验：葡萄...
