影响抗B杂交瘤细胞抗体分泌的因素研究VIP免费

影响抗B杂交瘤细胞抗体分泌的因素研究来源：青年人(Qnr.Cn)更新时间：2010/3/1117:23:53【字体：小大】摘要通过试管法和玻片法检测抗B抗体的效价和亲和力研究了影响抗B杂交瘤细胞抗体分泌的部分因素，结果显示：0.25mmol/L，0.5mmol/L丁酸钠和部分浓度rhIL-6能明显提高抗B抗体的效价和亲和力；胰岛素和维甲酸不能提高抗体的效价和亲和力。HAT培养基重筛选可使部分小体积细胞迅速死亡，抗B抗体的效价和亲和力明显提高，提示丁酸钠，rhIL-6和HAT重筛选可提高抗B杂交瘤细胞抗体的分泌。关键词单克隆抗体；血型定型试剂；杂交瘤细胞中图分类号：Q813.2文献标识码：A文章编号：1005-8915(2000)03-0146-03TheInfluentialElementsonSecretionofAnti-BAntibodyfromHybridmaYaoYuyou，ZhangLingling，WangXiaoqin(HefeiSoutheastMedicalScienceandTechologyDevelopmentCoLtd，AnhuiMedicalUniversity，Hefei230032)AbstractSomeinfluentedelementsofanti-Bantibodysecretedfromhybridomawasstudiedbytestingthetiterandaffinity.Theresultsshowedthat0.25mmol/Land0.5mmol/LsodiumbutyrateandvariousconcentrationsofrhIL-6couldsignificantlyincreasethetiterandaffinityofanti-B.Butitcouldnotbepromotedbyinsulinandretinoicacid.SomesmalleronesoftheexperimentalcellsdiedrapidlyintheHATmedium，afterwhichthetiterandaffinityofanti-Brosemarkedly.ItisconcludedthesodiumbutyrateandrhIL-6couldpromotethetiterandaffinityofanti-Bsecretedbyhybridoma，survivingclonesinHATmediumcouldsecretemoreanti-Bantibody.KeyWordsMonoclonalantibody，Bloodgroupingreagents，Hybridoma血型定型单克隆抗体试剂已广泛用于临床医学，法医学，考古学等工作中，与某些发达国家相比，我国血型定型试剂在效价和亲和力方面仍存在一定差距，有些企业因产品效价和亲和力达不到国家标准而致产量大幅度下降，故研究出提高抗体效价和亲和力的方法将有着深远的意义。目前国际上少数学者正致力于研究无血清培养基中杂交瘤细胞抗体分泌的影响因素［1］，但有关在含血清培养基中如何提高杂交瘤细胞抗体分泌报导甚少，为此我们开展了本实验。1材料1.1细胞系抗B-6-1-G11由本校分子生物学研究室提供。1.2试剂牛胰岛素(40U/ml)，上海生物化学试剂厂生产；RPMI1640，美国GIBCO产品；氨甲喋呤(Amiopterin，A，AR级)Fluka公司产品；丁酸钠(AR级)，次黄嘌呤(Hypoxanthine，H，AR级)，胸腺嘧啶核苷(Thymidine，T，AR级)，均为Sigma公司产品；rhIL-6，军事医学科学院产品；维甲酸，重庆华帮制药有限公司；小牛血清，合肥奶牛厂产品。1.3仪器CO2培养箱，美国IEVCO产品；倒置显微镜，重庆光学仪器厂产品。2方法2.1抗B杂交瘤细胞的培养将冻存于液氮中的抗B杂交瘤细胞复苏后，移入盛有10%小牛血清1640培养液中，置37℃，5%CO2培养箱中培养，待细胞长满底壁后传代，第3代细胞生长速度明显加快，此细胞即可作为实验细胞。2.2丁酸钠对抗B杂交瘤细胞抗体分泌的影响将实验细胞从培养瓶底壁吹下，洗涤2次后，用10%小牛血清1640培养液配成浓度为1×105个细胞/ml的细胞悬液，移入24孔培养板，每孔1ml，然后加入含不同浓度丁酸钠的1640培养液1ml，观察不同浓度丁酸钠对抗体分泌的影响。2.3rhIL-6，胰岛素，维甲酸对抗B杂交瘤细胞抗体分泌的影响细胞培养及实验细胞分组同前，最后向24孔培养板中加入不同浓度rhIL-6，胰岛素，维甲酸，观察它们对抗体分泌的影响。2.4HAT筛选对抗B杂交瘤细胞抗体分泌的影响HAT培养基由氨甲喋呤(A)，次黄嘌呤(H)，胸腺嘧啶核苷(T)组成，配制见文献［2］，用此培养基配制浓度1×105个细胞/ml的细胞悬液，移入24孔培养板每孔2ml，置37℃，5%CO2培养箱中培养，待培养一定时间后逐渐更换成普通培养基，另设无HAT对照，观察HAT筛选组与无HAT组之间的差别。2.5抗B抗体效价和亲和力测定见中国生物制品规程二部。2.6数据处理采用student't检验。3结果3.1丁酸钠对抗B杂交瘤细胞抗体分泌的影响按表1分组，结果显示：0.25mmol/L和0.5mmol/L的丁酸钠组抗体效价和亲和力明显提高，但当丁酸钠浓度为1mmol/L时，杂交瘤...