哮喘豚鼠气道重构中基质金属蛋白酶作者：王光辉，金发光，楚东岭，段丽【关键词】哮喘；气道重构；明胶酶B；金属蛋白酶1组织抑制剂【Abstract】AIM:Toinvestigatetherolesofmatrixmetalloproteinase9(MMP9)andtissueinhibitorofmetalloproteinase1(TIMP1)inairwayremodelingofasthmaricguineapigs.METHODS:GuineapigsweresensitizedwithovalbuminconjunctedwithAl(OH)3，andsubsequentlychallengedrepeatedlywithovalbuminaerosol.Theguineapigswererandomlydividedintothecontrolgroup，asthmatic4,6,8weekgroups.TheexpressionsofMMP9andTIMP1inbronchiandlungtissueswereobservedbyimmunohistochemistrycombinedwiththemicroimageanalysis．ThelevelsofMMP9mRNAandTIMP1mRNAweredeterminedbysemiquantitativePCR.RESULTS:①Afterrepeatedallergenchallenge,smoothmusclehyperplasiawasobviousinguineapigbronchi．ExpressionlevelsofMMP9andTIMP1intheepithelialcellsofbronchiweresignificantlyhigherinasthmaticanimalsthanthoseofcontrolgroup．②TheexpressionofMMP9inasthmaticguineapigslungtissueswas0.52±0.05in4weekgroup,0.74±0.05in6weekgroup,0.48±0.04in8weekgroup,0.21±0.04incontrolgroup（P<0.05）.TheexpressionofTIMP1inasthmaticguineapigslungtissueswas0.36±0.04in4weekgroup,0.83±0.05in6weekgroup,0.97±0.05in8weekgroup,0.20±0.02incontrolgroup（P<0.05）.③TheresultsofimmunocytochemistrywereconsistentwiththoseofRTPCR.④TheupregulationofMMP9expressionbecomeslowerthanTIMP1sincethe4thweekinasthmaticanimals.SoratioofMMP9/TIMP1wasdecreased.CONCLUSION:TheexpressionlevelsofMMP9andTIMP1werecloselycorrelatedwithasthmaairwayremodeling,andtheratioofMMP9/TIMP1mayreflectethedegreeofasthmaairwayremodeling.【Keywords】asthma;airwayremodeling;gelatinaseB;tissueinhibitorofmetalloproteinase1【摘要】目的：探讨哮喘豚鼠模型中基质金属蛋白酶（MMPs）及其组织抑制因子(TIMP)在哮喘气道重构发病中的作用.方法：重复雾化吸人卵蛋白建立豚鼠哮喘气道重构模型.实验分为对照组、哮喘激发4,6和8wk组.免疫组化方法结合显微图像分析检测MMP9,TIMP1的表达.半定量PCR检测MMP9及TIMP1mRNA水平.结果：①哮喘各组动物均出现管壁增厚、平滑肌增生等气道重构的特征性改变.②哮喘豚鼠MMP9的mRNA表达：哮喘4wk组为（0.52±0.05），哮喘6wk组为（0.74±0.05）；哮喘8wk组为（0.48±0.04）；对照组为（0.21±0.04）；哮喘各组与对照组组间比较差异有统计学意义（P<0.05).哮喘豚鼠TIMP1的mRNA水平：哮喘4wk组为（0.36±0.04）；哮喘6wk组为（0.83±0.05）；哮喘8wk组为（0.97±0.05）；对照组为（0.20±0.02）；哮喘各组与对照组组间比较差异有统计学意义（P<0.05）.③免疫组化的结果和RTPCR的结果一致.④在哮喘各时段组中，MMP9的表达增高自第4wk时明显变缓，而TIMP1仍持续增高，导致MMP9/TIMP1比例下降.结论：哮喘的气道重构与MMP9和TIMP1的表达密切相关，而二者的比例可能反映气道重构的严重程度.【关键词】哮喘；气道重构；明胶酶B；金属蛋白酶1组织抑制剂气道重构是气道反复炎症损伤与修复的结果，是造成哮喘患者不可逆气道阻塞的病理生理基础，主要表现为细胞外基质（extracellularmatrix,ECM）的沉积、基底膜增厚、气道平滑肌增生和肥厚等改变.其中ECM在气道壁沉积过多是引起气道壁纤维化和气流阻塞的主要原因之一［1］.正常ECM的合成与降解处于一个动态平衡之中，基质金属蛋白酶9(matrixmetalloproteinases,MMP9)与基质金属蛋白酶抑制因子1（tissueinhibitorofmetalloproteinase,TIMP1）平衡是维持ECM内环境稳定的决定因素［2］.本实验通过复制豚鼠哮喘模型,利用免疫组化和RTPCR方法测量不同阶段哮喘豚鼠模型肺中MMP9及TIMP1含量变化,并了解MMPs/TIMP在哮喘发病中的作用.1材料和方法1.1材料卵蛋白、结合生物素的羊抗兔IgG血清、ABC复合物均购自美国Sigma公司；兔抗TIMP1抗体、兔抗MMP9抗体购自武汉博士德公司；Trizol试剂购自美国Inv...
