副猪嗜血杆菌的分离与鉴定VIP免费

副猪嗜血杆菌的分离与鉴定李晓华*杨小燕郑新添戴爱玲李改娜（福建龙岩学院生命科学学院预防兽医学与生物技术福建省高等学校重点实验室福建省人畜寄生与病毒性疫病防控工程技术研究中心福建龙岩364000）摘要：从福建省龙岩市l例临床症状、病理剖检变化疑似副猪嗜血杆菌病的患病猪的关节液中分离到1株革兰氏染色阴性可疑菌株，经卫星现象、生化鉴定等实验室诊断，进一步以副猪嗜血杆菌的16SrRNA基因设计特异性引物进行PCR鉴定，确定该分离菌为副猪嗜血杆菌。药敏试验结果表明，分离株对环丙沙星、氨苄西林、阿米卡星、庆大霉素、氟苯尼考、磺胺类等药物敏感；对阿莫西林、诺氟沙星有抵抗力。关键词：副嗜血杆菌；分离鉴定；药敏试验IsolationandIdentificationofHaemophilusparasuisXiaohua-Lixiaoyan-Yangxintian-Zhengailing-Daigaina-Li1.CollegeofLifeSciences,LongyanUniversity,Longyan,FujianProvince364000,PRChina2.KeyLaboratoryofPreventiveVeterinaryMedicineandBiotechnology,LongyanUniversity,Longyan,FujianProvince364000,PRChina3.EngineeringResearchCenterforthePreventionandControlofZoonosis，FujianProvince364000,PRChinaAbstract：AcoveyofswinewhoseclinicalsymptomslookedlikeHaemophilusparasuisdiseasewerecheckedbylabtechnologies．Researchasbacteriaobservation，culturalcharacteristicsandbiochemicalpropertiesofHaemophilusparasuisweredone．Accordingtothesequenceofbacteriuml6SrRNA，specialprimersweredesignedforPCRamplification.TheresultsshowedthatthestrainwastentativelyidentifiedasHaemophilusparasuis．Thedrugsensitivetestsshowed：thestrainwassensitiveto环丙沙星、氨苄西林、阿米卡星、庆大霉素、氟苯尼考、磺胺类等药物敏感；对阿莫西林、诺氟沙星．Keywords：Haemophilusparasuis；isolationandidentification;drugsensitivetest——————李晓华(1968、8—),女,福建长汀人，高级实验师，主要从事实验室管理及动物疫病防控研究。基金项目：福建省科技厅创新平台建设项目（FJ200812）福建省科技计划项目（2008N2005）*通讯作者1猪副嗜血杆菌病(Haemophilusparasuis，Hps)又称“革拉瑟氏病”(Gllisser’sDisease)，是由副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis)引起的一种以多发性浆膜炎和关节炎为特征的疾病[1]。该菌寄生在健康猪鼻腔等上呼吸道内，主要通过空气直接接触传播，其他传播途径如消化道等亦可传播[2]。主要影响2～4周龄的猪，感染高峰为4～6周龄的猪[3]，发病率在10%～15%，严重时病死率可达50%。随着规模化养殖和养殖密度的增加，近年来，该病的发病率和死亡率均呈上升趋势，成为危害规模化养猪场最严重的细菌性疾病之一，给养猪业造成巨大的经济损失。2008年10月，福建龙岩某规模化猪场5—8周龄的保育猪发病严重,临床症状主要表现为精神沉郁、食欲减少，体温升高40-41℃,流鼻涕,腹式呼吸,被毛粗乱，消瘦、关节肿大，病猪不愿站立，跛行，病程达4个多月，发病率40%。剖检病变主要表现为体内有水肿、充血、血液不凝,呈暗红色,全身脏器多数有出血斑点,膀胱粘膜和肾皮质点状出血,喉、会咽斑状出血,胸腔内有大量淡红色液体、纤维性渗出物;心包有大量纤维素性渗出物，似菜花状；肺脏呈纤维素性胸膜肺炎,腹腔内有大量透明黄褐色渗出液；关节腔内充满黄色浑浊液。怀疑猪副嗜血杆菌感染而致，随机采集病料进行病原分离鉴定及药敏试验。1材料与方法1.1材料1.1.1病料采自福建省龙岩市某猪场疑似Hps发病仔猪的肺脏、心血、关节积液、心包液、气管。1.1.2培养基普通琼脂培养基、鲜血琼脂培养基、巧克力琼脂培养基由实验室配制、胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）培养基购于青岛海博公司；0.005%NAD巧克力琼脂培养基、SS培养基、麦康凯培养基购于北京陆桥技术有限责任公司；烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）购于成都贝斯特试剂有限公司1.1.3生化微量鉴定管H2S、蔗糖、麦芽糖、乳糖、半乳糖、山梨醇、甘露醇、尿素酶、赖氨酸、鸟氨酸、苯丙氨酸、葡萄糖、D-核糖、葡萄糖酸、柠檬酸盐均购自杭州天和微生物试剂有限公司。1.1.4药敏试纸：强力...