中南大学学报(医学版)，Cem“面(dSc)2oo7，32(4)64l软骨细胞与瑞福纳米人工骨复合物的体外构建肖涛，彭程，罗远明，林绵辉，刘夏君(1．中南大学湘雅二医院骨科创伤研究室，长沙410011；2．上海市奉城医院，上海201411：3，宝鸡市中医院，山西宝鸡721001)[摘要]目的：评估瑞福纳米人工骨(胶原基纳米骨，nano．hydmxy印atie／collagen，nHAC)作为软骨组织X-程细胞支架材料的可行性。方法：选择骨性关节炎(OA)患者行髋关节置换手术后外观大致正常的关节软骨，消化、分离、体外培养扩增后种植到nHAC中，复合物体外培养后进行Ⅱ型胶原免疫组织化学检测和扫描电镜观察。结果：软骨细胞可以长入nHAC支架材料中。同期软骨细胞保持了正常的外形且可分泌Ⅱ型胶原。结论：nHAC可以作为软骨细胞的栽体。[关键词]软骨细胞；组织X-程；胶原基纳米骨；支架材料；体外[中图分类号]R68[文献标识码]A[文章编号]1672．7347(2007)04．0641—05Cultureofchondrocytesusingnano-hydroxyapatite／collageninvitroXIAOTao，PENGCheng，LUOYuan—ming，LINMian—hui，LIUXia．jun(1．ResearchlrutituteofTraumaticOrthopaedics，SecondXiangyaHospital，CentralSouthUniversity，Changsha41O011；2．FengchengH~phdofShanghai，Shangha／201411；3．eaojiHospi~ofTraditionalChineseMedicine，Shangxi721001，China)Abstract：ObjectiveToevaluatethevalueofthenano—hydroxyapatite／collagen(nHAC)asascaffoldforcaailagetissueengineering．MethodsThenormalcartilagefrompatientsaftertotalhiparthroplastyofosteoarthritiswasselected，andthenchondrocytesweredigested，separated，andamplificatedinvitro．ThechondrocyteswereseededontothenHACscafoldandwereculturedina3一dimensionalenvironmentfor5and10days．Theeffectsofthecompositescaffoldonthecelladhe—sion，proliferation，morphologicalchanges，andsynthesisoftheextracellularmatrixwereobservedbyscanningelectronicmicroscopyandimmunohistochemistry．ResultsThechondrocytescouldadheretothesurfaceofthescafolds，proliferate，andmigrateintothescaffolds．Theymaintainedroundandcouldsecreteextracellularmatrixontheporousscaffold．ConclusionThenHACcanbeusedasthecartilagecellcarrier．Keywords：chondrocytes；tissueengineering；nano—hydroxyapatie／collagen；scafold；invitro[JCentSouthUniv(MedSci)，2007，32(4)：0641—05]目前软骨组织工程中应用的支架材料较多，较常用的细胞支架材料是聚乳酸和聚乙醇酸，应用此支架培养软骨细胞已成功地再生出软骨组织，但是植于体内后可以引起非特异性无菌性炎症反应⋯，甚至致癌。国外已陆续地开展体外扩增的软骨细胞移植于体内修复软骨缺损的临床实践，并已取得一定的临床经验和成果；但国内这方面的报道较少，大部分还处于动物实验阶段，而收稿日期(Dateofreception)2006-09-06作者简介(Biography)肖涛(1965一)，男，湖南湘潭人，副教授，博士，主要从事外伤的研究。通讯作者(Correspondingauthor)肖涛，E-mail：xiaotaoxyl@163．con基金项目(Foundationitem)湖南省科技厅课题(06FJ3176)ThisworkwassupportedbyDepartmentofScienceandTechnologyofHu—manProvinceofP．R．China(06FJ3176)维普资讯http://www.cqvip.com中南大学学报(医学版)，2007，32(4)且多使用幼年动物的软骨细胞，使用成人关节软骨细胞的较少。由于种子细胞来源、支架材料、细胞因子等研究尚未取得实质性突破，因此，大规模地体外培养软骨细胞并将之移植于体内修复各种关节软骨的缺损尚有一定困难，而应用新型的纳米骨材料作为软骨细胞载体体外扩增成人关节软骨细胞的研究较少。本研究通过体外构建软骨细胞与瑞福纳米人工骨复合物，旨在探讨瑞福纳米人工骨作为软骨组织工程细胞支架材料的可行性。1材料与方法1．1主要仪器与试剂DMEM／F12(1：1)培养基和胎牛血清系美国Sigma公司出品，0．25％胰蛋白酶和S一100抗体系美国Gibco公司出品，SABC试剂盒系武汉博士德生物工程有限公司产品，JSM5600一LV型...
