实时荧光定量PCR检测临床上的运用与意义VIP免费

实时荧光定量PCR检测临床上的运用与意义叶明奇（厦门安普利生物工程有限公司，福建厦门343，技术工程部）【摘要】目的分析临床使用实时荧光定量PCR法在临床检测的各个项目情况，并探讨实时荧光定量PCR法的临床意义。主要介绍核酸DNA或RNA的提取、实时荧光定量PCR技术以及实时荧光定量PCR方法临床运用的意义：乙型肝炎病毒核酸实时荧光定量ＰＣＲ检测在临床诊断中的应用、实时荧光PCR检测丙型肝炎病毒核酸及其临床应用、实时荧光定量PCR法在检测血浆结核杆菌DNA的临床应用、实时荧光定量PCR检测HPV病毒的临床运用、泌尿生殖道感染沙眼衣原体的临床应用、传染性疾病检测临床应用、测胰腺癌中HIF1α、VEGF和bFGF的表达及其临床意义、绵羊肺腺瘤病毒检测、胃癌淋巴结微转移敏感且特异的方法，实时荧光定量PCR法在临床检测的运用在临床分期、判断预后以及治疗方案选择具有重要意义。【关键词】实时荧光定量PCR；乙型肝炎；丙型肝炎；传染性疾病；HPV；MTB；[Abstract]Objectiveusingreal-timefluorescencequantitativePCRmethodinclinicaldetectionofeachproject,andtoexploretheclinicalsignificanceofreal-timefluorescentquantitativePCRmethod.MainlyintroducesthenucleicacidextractionofDNAorRNA,real-timefluorescentquantitativePCRandreal-timefluorescencequantitativePCRmethodforclinicalapplicationsignificance:hepatitisBvirusDNAbyreal-timefluorescentquantitativePCRassayapplicationinclinicaldiagnosis,real-timefluorescentPCRdetectionofhepatitisCvirusnucleicacidanditsclinicalapplication,thereal-timefluorescencequantitativePCRassayinthedetectionofMycobacteriumtuberculosisDNAinplasmaclinicalapplication,real-timefluorescencequantitativePCRdetectionofHPVvirus,theclinicalapplicationofurogenitalChlamydiatrachomatisinfectionintheclinicalapplicationofinfectiousdiseases,clinicalapplication,measuredinpancreaticcancerHIF1α,VEGFandbFGFexpressionanditsclinicalsignificance,sheeppulmonaryadenomatosisvirusdetectionoflymphnodemicrometastasis,sensitiveandspecificmethod,real-timefluorescencequantitativePCRmethodappliedinclinicaldetectioninclinicalstaging,prognosisandtreatmentoptionshaveimportantsignificance.[keyword]real-timefluorescencequantitativePCR;hepatitisB;hepatitisCvirus;infectiousdiseases;HPV;MTB;PCR法最初由Khorana(1971)等提出在体外经DNA变性,与适当引物杂交,再用DNA聚合酶延伸,克隆DNA的设想。此想法的提出在1983年,美国Cetus公司Mullis博士发明了PCR技术,使Khorana的设想变成实现。1985年，美国Perkin—ElmerCetus公司发明了具有划时代意义的聚合酶链反应(Polymerasechainreaction．PCR)，人们梦寐以求的体外无限扩增核酸片段的愿望成为现实。随便人类对PCR法的研究深入1988年Saiki等将耐热DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）引入了PCR技术，使PCR技术的应用价值大大提高。1989年美国《Science》杂志列PCR为十余项重大科学发明之首,比喻1989年为PCR爆炸年。国际为表彰Mullis在PCR的发明，Mullis荣获1993年度诺贝尔化学奖。随便PCR技术的运用在医疗检测的方面推广，已经作为一标准取代细胞法的“金标准”，目前实时荧光定量PCR技术被广泛应用于实验研究、临床检测中。与普通的PCR相比。实时荧光定量PCR技术具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优式，RT—FQ—PCR相比传统的PCR具有以下重要优点：它使用荧光基团对PCR每个循环中的扩增产物进行实时监测，操作简便且具有很高的敏感性和特异性；实现了定性到定量分析的飞跃；DNA扩增及其分析过程均在同一封闭系统中完成，避免了样品和产物的污染，且不需要复杂的产物后续处理．从而能得到可靠和可重复性的结果；动力学范围宽，允许对样品的靶序列进行不同数量级的分析。目前应用实时荧光定量PCR检测在临床的项目很多如：实时荧光定量ＰＣＲ检测ＨＢＶ的ＤＮＡ含量的方法，探讨其在乙型肝炎预防、诊断、治疗及判断病情等方面...