实验3血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳(Celluloseacetatemembraneelectrophoresisofserumproteins)遵义医学院生物化学教研室朱欣婷实验思路蛋白质的理化性质有哪些
蛋白质的分离方法有哪些
本次实验利用了哪个性质
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掌握电泳法分离蛋白质的原理;2
掌握醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白的原理和方法;3
进一步熟悉721型分光光度计的使用生物化学教研室朱欣婷分离蛋白质的方法分离方法沉淀法盐析法有机溶剂沉淀法层析法电学法电泳法等电聚焦超速离心法离子交换层析吸附层析凝胶过滤(分子筛)亲和层析生物化学教研室朱欣婷(一)电泳技术(electrophoresis)电泳:带电粒子在电场的作用下向着与其电性相反的电极移动的现象
电泳技术:指利用电泳现象对混合物进行分离分析的技术
生物化学教研室朱欣婷一、电泳的原理以蛋白质为例:PrCOO-NH2PrCOO-NH3+PrCOOHNH3+H+OH-H+OH-pH>pIpH=pIpH纤维状分子分子大小:生物化学教研室朱欣婷Q越多,u越大;分子小,r越小,u越大;2
缓冲溶液:pH值:(pH-pI)越大,Q越多,u越大离子强度(I):I越大,电动电势越小,u越小;I越小,电动电势越大,u越大,但样品易扩散
离子强度如果过低,缓冲液的缓冲容量小,不易维持pH恒定选择离子强度时要两者兼顾,一般离子强度的选择范围在0
生物化学教研室朱欣婷电场强度:电泳支持物上每厘米的电位降,也称电势梯度
电场强度(X)X越大,u越快
支持物越短,X越大,u越快
电场强度越大或支持物越短,电流将随之增加,产热也增加,影响分离效果
在进行高压电泳的时候必须用冷却装置,否则可引起蛋白质等样品发生热变性而无法分离
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支持介质:目前常用的电泳支持物:①纤维薄膜(玻璃纤维薄膜,醋酸纤