实验3血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳（Celluloseacetatemembraneelectrophoresisofserumproteins）遵义医学院生物化学教研室朱欣婷实验思路蛋白质的理化性质有哪些？蛋白质的分离方法有哪些？本次实验利用了哪个性质？生物化学教研室朱欣婷1.掌握电泳法分离蛋白质的原理；2.掌握醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白的原理和方法；3.进一步熟悉721型分光光度计的使用生物化学教研室朱欣婷分离蛋白质的方法分离方法沉淀法盐析法有机溶剂沉淀法层析法电学法电泳法等电聚焦超速离心法离子交换层析吸附层析凝胶过滤（分子筛）亲和层析生物化学教研室朱欣婷（一）电泳技术(electrophoresis)电泳：带电粒子在电场的作用下向着与其电性相反的电极移动的现象。电泳技术:指利用电泳现象对混合物进行分离分析的技术。生物化学教研室朱欣婷一、电泳的原理以蛋白质为例：PrCOO-NH2PrCOO-NH3+PrCOOHNH3+H＋OH－H＋OH－pH>pIpH=pIpH
纤维状分子分子大小：生物化学教研室朱欣婷Q越多，u越大；分子小，r越小，u越大；2.缓冲溶液：pH值：(pH-pI)越大，Q越多，u越大离子强度(I)：I越大，电动电势越小，u越小；I越小，电动电势越大，u越大，但样品易扩散。离子强度如果过低，缓冲液的缓冲容量小，不易维持pH恒定选择离子强度时要两者兼顾，一般离子强度的选择范围在0.02～0.2之间。生物化学教研室朱欣婷电场强度：电泳支持物上每厘米的电位降，也称电势梯度。3.电场强度(X)X越大，u越快。支持物越短，X越大，u越快。电场强度越大或支持物越短，电流将随之增加，产热也增加，影响分离效果。在进行高压电泳的时候必须用冷却装置，否则可引起蛋白质等样品发生热变性而无法分离。生物化学教研室朱欣婷4.支持介质：目前常用的电泳支持物：①纤维薄膜(玻璃纤维薄膜，醋酸纤维薄膜)②凝胶(琼脂糖凝胶，聚丙烯酰胺凝胶)生物化学教研室朱欣婷负极正极－－－－－－－－表面带负电荷带正电荷的水层携带粒子向负极移动如果样品原本是移向负极的，则泳动的速度加快；如果样品原本是移向正极的，则泳动的速度减慢。电渗作用：电渗：在电场作用下液体对固体支持物相对移动的现象。＋＋＋＋＋＋＋＋生物化学教研室朱欣婷以纸电泳为例:（一）按支持物的物理性状不同，区带电泳可分为：1．滤纸及其它纤维(如玻璃纤维、醋酸纤维、聚氯乙烯纤维薄膜)电泳2．粉末电泳：如纤维素粉、淀粉电泳；3．凝胶电泳：如琼脂、琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶电泳；4．丝线电泳：尼龙丝、人造丝电泳。三、区带电泳的分类生物化学教研室朱欣婷（二）按支持物的装置形式不同，区带电泳可分为：1．平板式电泳：支持物水平放置；2．垂直板式电泳：聚丙烯酰胺凝胶可做成垂直板式电泳；3．垂直柱式电泳：聚丙烯酰胺盘状电泳生物化学教研室朱欣婷(三)按pH的连续性不同，区带电泳可分为：1．连续pH电泳：即整个电泳过程pH保持不变，如常用的纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳等。2．非连续pH电泳：缓冲液和电泳支持物间有不同的pH的电泳，如聚丙烯酰胺凝胶盘状电脉，等电聚焦电泳等。生物化学教研室朱欣婷（二）血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳生物化学教研室朱欣婷【实验原理】1.血清中几种主要蛋白组分血清蛋白质等电点分子量占总蛋白的％清蛋白4.6469,00057～72α1－球蛋白5.06200,0002～5α2－球蛋白5.06300,0004～9β－球蛋白5.1290,000～150,0006.5～12γ－球蛋白6.85～7.3156,000～950,00012～20缓冲液pH=8.6pI＜pH血清蛋白带负电荷,在电场中向正极移动生物化学教研室朱欣婷血清蛋白依次分为清蛋白，球蛋白的α1、α2、β、γ五个区带请预测血清蛋白电泳区带图清蛋白α1γα2β生物化学教研室朱欣婷膜条经过氨基黑10B染色后显出清晰色带。2.定量生物化学教研室朱欣婷各色带蛋白质含量与染料结合量基本成正比。可将各色带剪开，分别溶于...
