实验室主题文件编号XGYYJ-6-XB-209东莞市谢岗人民医院性病实验室单纯疱疹病毒实验室检测第-1-页共9页第1版第次修改颁布日期：2012年1月1日-1-制定者审核者批准者黄金印罗衬银罗衬银2011年12月1日2012年1月1日2012年1月1日单纯疱疹病毒实验室检测单纯疱疹病毒是引起生殖器溃疡的主要病原之一。HSV包括HSVI型和HSV2型，多数生殖器疱疹有HSV2型引起。生殖器疱呈慢性复发过程，原发感染常表现为潜伏状态，尽管临床可以根据典型的水泡诊断生殖器疱疹，但三分之二的感染表现为无症状，且潜伏期排毒。实验室诊断对于无症状感染具有重要意义，不仅防止性传播，而且防止母婴传播。细胞学检查[原理]IISV感染宿主细胞可形成多核巨细胞，细胞经涂片染色，通过检查多巨细胞病变帮助诊断。[材料]姖姆萨染液巴氏染液[方法]1.标本采集：①疱液：用结核菌素注射器和25针头，穿刺水疱抽取疱液，转入病毒运输液中，或用针头刺破水疱后棉拭子吸取疱液。②溃疡：用棉拭子抹去溃疡表面的痂皮或污物，再用干净拭子用力擦拭溃疡基底部，充分沾取组织液或渗出液。③宫颈：见淋球菌取材。2.将标本涂片，室温干燥数分钟。3.染色①皮肤黏膜标本用甲不相酵固定5-10分钟，用姖姆萨染液染30分钟，待干、镜检。②宫颈标本用95%乙酵固定15-60分钟，用巴氏溧色（见HPV染色），镜检。[结果]感染细胞呈胞浆空泡变，感染细胞相互融合成多核巨细胞，有时见核内包涵体。[注意事项]HSV感染细胞在水疱或溃疡基底处，尽可能取水疱标本。[临床意义]查到多核巨细胞或包涵体可作辅助性诊断。但其敏感性较培养法低。实验室主题文件编号XGYYJ-6-XB-209东莞市谢岗人民医院性病实验室单纯疱疹病毒实验室检测第-2-页共9页第1版第次修改颁布日期：2012年1月1日-2-制定者审核者批准者黄金印罗衬银罗衬银2011年12月1日2012年1月1日2012年1月1日HSV细胞培养[原理]HSV在体外感染细胞，引起细胞病变，通过观察细胞病变初步判断病毒的进一步结合免疫学方法鉴定。[材料]1.Vero、Hela和BHK细胞等2.标本运输培养基（配制见附录I）。3.HSV生长培养基（配见附录I）。4.HSV维持培养基（配见附录I）。6.HSV荧光单克隆抗体试剂。[方法]2.标本采集：①疱液：用结核菌素注射器和25针头，穿刺水疱抽取疱液，转入病毒运输液中，或用针头刺破水疱后，用棉拭子充分沾取疱液，洗入运输液中。②溃疡：用棉拭子去除溃疡表面的痂皮或污物，再用干净拭子用力擦拭溃疡基底部，充分沾取组织液或渗出液，将标本洗入运输液中。③宫颈：见淋球菌取材。标本置于运送培养基中，24小时接种，超过24小时应置于低温冰箱保存。2.细胞复苏和传代：冻存细胞管于37℃速溶内容物内容物移至细胞生长培养基中37℃5%CO2环境下培养8小时更换生长培养基，再培养2-5天细胞成片倒去培养液加入5ml胰酶-EDTA洗涤倒去洗涤液加入5ml胰酶-EDTA液培养瓶置于37℃，4分钟细胞脱落转移至10ml生长培养基加入10%DMSO分装保存于超低温冰箱备用实验室主题文件编号XGYYJ-6-XB-209东莞市谢岗人民医院性病实验室单纯疱疹病毒实验室检测第-3-页共9页第1版第次修改颁布日期：2012年1月1日-3-制定者审核者批准者黄金印罗衬银罗衬银2011年12月1日2012年1月1日2012年1月1日3.单层细胞制备：胰酶消化细胞混合液计数调整细胞数量为1X105/ml分装24孔培养板，每孔0.5ml37℃培养8小时单层细胞4.标本接种与感染细胞：0.3-0.5ml标本培养孔（1-2孔）37℃，5%CO2下1-2小时吸去标本液，换维持培养基。37℃培养3-7日每日观察[细胞病变（CPE）记录：0为无CPE；1+为25%细胞CPE；2+为25-49%细胞CPE；3+为50-74%细胞CPE；4+为75%以上细胞CPE。]荧光单抗染色5.染色镜检：直接免疫荧光法：感染细胞涂片用甲醇固定10分钟，淋洗。加荧光标记单抗隆抗体，37℃染色30分钟。封片后镜检。[结果]感染细胞阳性可见苹果绿色荧光的包涵体。[注意事项]实验室主题文件编号XGYYJ-6-XB-209东莞市谢岗人民医院性病实验室单纯疱疹病毒实验室检测第-4-页共9页第1版第次修改颁布日期：2012年1月1日-4-制定者审核者批准者黄金印罗衬银罗衬银2011年12月1日2012年1月1日2012年1月1日1.棉拭和木杆含有对病毒有影响的物质，应将标本洗脱到运输培养基后...
