·：b·生物化学与生物物理进展ProgBiochem．Biophys、青蔓脱难处理还是完整细胞的转化率都很骶．能到1o每微克DNA的转化率就很不计I．最近Allon等改进了电穿孔方法．对’c：i’眨阳性菌进行五种质粒的电转移，最：Jl1勺转化率达到lo?每微克DNA，比原来的电擘L方法提高丁40多倍．比常规诱导方法提高J4000倍．2．4电穿孔技术的特殊应用a．电插入法(eIectroinserti。n)将蛋白分子插八细胞膜．当外加电场稍大于或等于临界值，时．在细胞膜上形成贯通于细胞内外的亲水4Lil~．可将外源蛋白质插入细胞质膜，而不r‘明显的细胞损伤．例如将CD4受体插入细胞膜上，不仅可以延长受体的循环生活期．而且提供了一种治疗艾滋病的方法．b．将蛋白分子导入细胞．在最佳电穿孔条件]．既可使细胞损伤最小，又可使细胞有效地通透，将内切酶和抗体等导入细胞．例如褂肿瘤天门冬酰胺合成酶的单克隆抗体导入鼠淋巴细胞和人成纤维细胞HT一5中，细胞成活率达809O，而且其中90的活细胞结合了抗体．c．建立基因库．电穿孔技术现已被公认为在原核细胞中进行基因转移的最有效的手段．刮一些好的菌株，其基因转化率高达10每微克DNA．从而仅用少量DNA即可构建综合的基因库(genelibrary)．Dower等“利用电穿孔方法已经开发构建了大于10个独立的重组／；；D质粒库．d．原位研究酶活性．例如海胆卵在受精过程中，其生理活性增强．而酶是影响新陈代谢的因素；研究酶调节机制是令人感兴趣的问题．电穿孔对细胞完整的干扰最小．可以把带标记的底物导入细胞，进行酶活性的原位研究．参考文献lKaIerKVIStJonesTB．BiophysJ．1990；57：1732正和睦，杭军．中国科学(B辑)，l992}(10)；10383I'songTY．BiophysJ，19g1{60：2g74SowerAEInChangDCedGuidetOe]ectroporadonande]ecirofuslon．SanI)ie~；AcademicPress，1992：1195汪和睦，鲁玉觅武延宽等生物物理学报，1986{2(4)：3646ChangDC．R⋯TSBiophysJ，1990；58：17郑强，赵南明中国科学(B辑)，1988I(8j：8268汪和睦，鲁玉瓦，谢廷栋等．科学通报．1987}32(13)：10329GravekampC，Santo]iD．VreudenhJ]Retf．Hybridoma，1987；6(2：l2l‘10TDmltaM，TsongTYBiochemBiophystat1990I1055：199}l】XieTD，TsongTYBiophysJ，1993；65：l684l2RhodesCA，Pj⋯DAa1．Scien~，1988i240：204Il3AHenSP，BtaschekHP．FEMSMicrobio]Ⅱett，1990{70：2l7．【4DowerWJ，Cwir]aSEIn：ChangDCed．Guidetoelee—troporatlonandeIectrofusionSanDieago：AcademlcPres．1992．29重组人巨噬细胞集落刺激因子的结军事100850军事医学科学院基础医学研究所．北京构与功能f／、＼、，／R7陴摘要重组人粒细胞——巨噬细胞集落刺激因子(rhGM—CSF)已经在原核、真棱细胞表达并得到纯品芝的结构与功能研究提供了有利条件．目前国内外对于rhGMCSF的结构与功能研究主要集中在晶津结掏、化学修饰、溶液中构象和稳定性以及襄变和分子设计方面分子结构与功能的关系以及与GM—CSF受体作用机理研究也取得了突破性进展镐日期：1993—05—05．修回日期：1993—08—127，．王∥维普资讯http://www.cqvip.com生物化学与生物物理进展ProgBiochem．Biophys．·327·关键词重组人粒胞～里型塞苎堂里．．：一集子共有四L’SF，G—LSF，MCSF，MultiCSF(I13)，f]x~‘F造血细胞的生长和分化起介导作用．人GM—CSF基因定位在5q23—3l口．rhGMCSF已经在酵母、COS细胞[、、大肠杆菌：得到表达和纯化，Curtis等还在酵母细胞表达了人GM—CSFIL一3融合蛋白．人GMCSF的主要生物学功能是刺激髓祖细胞增殖和成熟，提高陛、嗜酸性粒细胞和巨噬细胞的数量．在临床上它用于癌症化疗而引起的白细胞减步症．骨髓移植．骨髓增生异常综合症及再生障碍性贫血．并作为爱滋病的辅助药物以增强病人的脊髓功能．1rhGM—CSF的高级结构人GM—CSF为144个氨基酸残基的多肽．含有17个残基的信号肽．成熟肽为127个残基(分子量为14477)．两对二硫键对于结构的稳定性和生物活性起重要作用．真核细胞来源的rhGM—CSF可能含有两个N一糖基化位点和多个O一糖基化位点．因糖基化程度不同．分子量也有差异．由于人GM—CSF在大肠杆菌中已高教表达，使rhGMCSF...
