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重组人半乳凝集素1的原核表达、纯化及生物活性检测(标注)VIP免费

重组人半乳凝集素1的原核表达、纯化及生物活性检测(标注)_第1页
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鑫丌r盘RSIN技BIOT术ECHN通OLOG讯Y⋯voi.2⋯1N—o.3一一一May,2⋯010一LErrrE··,315doi:10.3969/j.issn.1009-0002.2010.03.004研究报告重组人半乳凝集素一1的原核表达、纯化及生物活性检测李晶,贺丽清,舒震,侯建伟,陈霖,徐玉金,张伟,张英起第四军医大学药学系生物制药学教研室,陕西西安710032【摘要】目的:在大肠杆菌中表达半乳凝集素一1(galectin-I),并进行纯化及生物活性检测。方法:将人半乳凝集素一1基因克隆至带有His融合标签的原核表达载体pQE一30上,转化大肠杆菌M15,经IFrG诱导表达,表达产物经亲和层析纯化后,进行Western印迹鉴定,并用红细胞凝集试验检测其生物学活性。结果:双酶切鉴定和核苷酸序列测定表明重组表达质粒pQE一30一Galecfin—l构建正确;重组蛋白的表达量约占菌体总蛋白的50%,主要以可溶形式表达,纯化后蛋白纯度达95%以上,且具有良好的红细胞凝集活性。结论:在大肠杆菌中表达了重组人半乳凝集素一l,且具有良好的生物活性。[关键词】重组人半乳凝集素-1;原核表达;纯化;红细胞凝集[中图分类号】Q78【文献标识码】A【文章编号】1009—0002(2010)03_0315一04ProkaryoticExpression,PurificationandBiologicalActivityDetermi-nationofHumanGalectin-1LIJing,HELi-Qing,SHUZhen,HOUJian-Wei,CHENLin,XUYu-Jzrt,ZHANGWei,ZHANGYing-QiDepartmentofBiopharmaceufics,SchoolofPharmacy,FourthMilitaryMedicalUniversity,Xi'an710032,China[Abstract]Objective:Toexpresshumangalectin-1inEscherichiacolianddeterminethebiologicalactivityofrecombinantgalectin-I.Methods:Galectin-IgeneWtl8clonedintoprokaryoticexpressionvectorpQE一30withHisfusionlabeling,andtheconstructedrecombinantplasmidWaStransformedtoE.coliM15forexpressionunderin—ducfionofIPTG.Theexpressedproductw鹊pu面edbyaffinitychromatographyandidentifiedbyWesternblot,thenthebiologicalactivityW88determinedbyhemagglutinationtesLResults:RestrictionanalysisandnucleotidesequencingprovedthatrecombinantexpressionvectorpQE-30-Galectin-1Wagconstructedcorrectly.Theexpressedproductcontained50%oftotalsomaticproteinandmainlyexistedinasolubleform.Afterpurification,thel['ecom-binantgalectin-1reachedapurityofIllOl[℃than95%andshowedgoodhemagglutinatingactivity.Conclusion:Re—combinanthumangalectin-1warsuccessfullyexpressedinE.coliandshowedhishbiologicalactivity.【Keywords】recombinanthumangalectin-1;prokaryoticexpression;purification;hemagglutination半乳凝集素(galectin)是凝集素中一个进化上十分保守的家族,其结构中包含有一段长约130个氨基酸残基的糖类识别区(carbohydraterecognitiondomain,CRD),对B一半乳糖苷具有特殊亲和力I“。迄今,已有15个哺乳动物半乳凝集素家族成员被发现,根据其分子结构可分为3类:①原型,含有单一CRD,包括半乳凝集素一l、一2、一5、_7、一10、一13、一14、一15;②串联重复型,含由不同长度多肽相连的2个CRD,包括半乳凝集素-4、一6、一8、一9、一12;③嵌合型,包含一个CRD和一个胶原蛋白样重复结构域,半乳凝集素一3是其惟一成员闻。半乳凝集素一1是第一个被发现的哺乳动物半乳凝集素,广泛分布于肌肉、脾脏、胸腺、感觉和运动神经系统等组织M。根据其不同的分布,半乳凝集素一l在多种生物过程,如细胞黏附、细胞生长、肿瘤的转移和迁徙、T细胞的成熟、T细胞和胸腺细胞的诱导凋亡及神经再生等中发挥重要作用IS-121。我们在原核表达系统中表达了具有生物活性的重组人半乳凝集素一1,为进一步研究其生物功能提供了必要的基础条件。[收稿日期]2010-01一ll[基金项目]国家自然科学基金(30972672,30801002)[作者简介]李晶(1982一),男,硕士研究生【通信作者]张英起。(E-mail)zhangyqh@fmmu.edu.cn万方数据316生物技术H通讯v-.21No.3~,2010LETIERSINBIOTECNOLOGY0121NoMay2010HV·,1材料及方法1.1材料大肠杆菌M15,质粒pACT-Gale...

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