重组人半乳凝集素1的原核表达、纯化及生物活性检测(标注)VIP专享VIP免费

鑫丌r盘RSIN技BIOT术ECHN通OLOG讯Y⋯voi．2⋯1N—o．3一一一May，2⋯010一LErrrE··，315doi：10．3969／j．issn．1009-0002．2010．03．004研究报告重组人半乳凝集素一1的原核表达、纯化及生物活性检测李晶，贺丽清，舒震，侯建伟，陈霖，徐玉金，张伟，张英起第四军医大学药学系生物制药学教研室，陕西西安710032【摘要】目的：在大肠杆菌中表达半乳凝集素一1(galectin-I)，并进行纯化及生物活性检测。方法：将人半乳凝集素一1基因克隆至带有His融合标签的原核表达载体pQE一30上，转化大肠杆菌M15，经IFrG诱导表达，表达产物经亲和层析纯化后，进行Western印迹鉴定，并用红细胞凝集试验检测其生物学活性。结果：双酶切鉴定和核苷酸序列测定表明重组表达质粒pQE一30一Galecfin—l构建正确；重组蛋白的表达量约占菌体总蛋白的50％，主要以可溶形式表达，纯化后蛋白纯度达95％以上，且具有良好的红细胞凝集活性。结论：在大肠杆菌中表达了重组人半乳凝集素一l，且具有良好的生物活性。[关键词】重组人半乳凝集素-1；原核表达；纯化；红细胞凝集[中图分类号】Q78【文献标识码】A【文章编号】1009—0002(2010)03_0315一04ProkaryoticExpression，PurificationandBiologicalActivityDetermi-nationofHumanGalectin-1LIJing,HELi-Qing,SHUZhen,HOUJian-Wei,CHENLin,XUYu-Jzrt，ZHANGWei，ZHANGYing-QiDepartmentofBiopharmaceufics，SchoolofPharmacy，FourthMilitaryMedicalUniversity，Xi'an710032，China[Abstract]Objective：Toexpresshumangalectin-1inEscherichiacolianddeterminethebiologicalactivityofrecombinantgalectin-I．Methods：Galectin-IgeneWtl8clonedintoprokaryoticexpressionvectorpQE一30withHisfusionlabeling,andtheconstructedrecombinantplasmidWaStransformedtoE．coliM15forexpressionunderin—ducfionofIPTG．Theexpressedproductw鹊pu面edbyaffinitychromatographyandidentifiedbyWesternblot，thenthebiologicalactivityW88determinedbyhemagglutinationtesLResults：RestrictionanalysisandnucleotidesequencingprovedthatrecombinantexpressionvectorpQE-30-Galectin-1Wagconstructedcorrectly．Theexpressedproductcontained50％oftotalsomaticproteinandmainlyexistedinasolubleform．Afterpurification，thel['ecom-binantgalectin-1reachedapurityofIllOl[℃than95％andshowedgoodhemagglutinatingactivity．Conclusion：Re—combinanthumangalectin-1warsuccessfullyexpressedinE．coliandshowedhishbiologicalactivity．【Keywords】recombinanthumangalectin-1；prokaryoticexpression；purification；hemagglutination半乳凝集素(galectin)是凝集素中一个进化上十分保守的家族，其结构中包含有一段长约130个氨基酸残基的糖类识别区(carbohydraterecognitiondomain，CRD)，对B一半乳糖苷具有特殊亲和力I“。迄今，已有15个哺乳动物半乳凝集素家族成员被发现，根据其分子结构可分为3类：①原型，含有单一CRD，包括半乳凝集素一l、一2、一5、_7、一10、一13、一14、一15；②串联重复型，含由不同长度多肽相连的2个CRD，包括半乳凝集素-4、一6、一8、一9、一12；③嵌合型，包含一个CRD和一个胶原蛋白样重复结构域，半乳凝集素一3是其惟一成员闻。半乳凝集素一1是第一个被发现的哺乳动物半乳凝集素，广泛分布于肌肉、脾脏、胸腺、感觉和运动神经系统等组织M。根据其不同的分布，半乳凝集素一l在多种生物过程，如细胞黏附、细胞生长、肿瘤的转移和迁徙、T细胞的成熟、T细胞和胸腺细胞的诱导凋亡及神经再生等中发挥重要作用IS-121。我们在原核表达系统中表达了具有生物活性的重组人半乳凝集素一1，为进一步研究其生物功能提供了必要的基础条件。[收稿日期]2010-01一ll[基金项目]国家自然科学基金(30972672，30801002)[作者简介]李晶(1982一)，男，硕士研究生【通信作者]张英起。(E-mail)zhangyqh@fmmu．edu．cn万方数据316生物技术H通讯v-．21No．3～，2010LETIERSINBIOTECNOLOGY0121NoMay2010HV·，1材料及方法1．1材料大肠杆菌M15，质粒pACT-Gale...