第27卷第9期2007年9月南京医科大学学报(自然科学版)ACTAUNIVERSITATISMEDICINALISNANJING(NaturalScience)硝苯地平(nifedipine,NIF)属于二氢吡啶类钙离子拮抗剂,用于冠心病、高血压的治疗。临床观察表明服用硝苯地平有导致牙龈增生的不良反应。但其引起牙龈增生的机制目前尚不清楚。一些研究发现硝苯地平导致药物性牙龈增生组织中胶原,特别是Ⅰ型胶原大量沉积。Ⅰ型胶原是牙龈结缔组织主要组成成分,也是重要的细胞外基质之一,其自身新陈代谢是健康的牙龈组织的重要保障。本实验目的是观察硝苯地平对体外原代培养的人牙龈成纤维细胞分泌Ⅰ型胶原水平的影响,以探讨硝苯地平导致牙龈增生的机制。1材料和方法1.1材料取材来自于本院口腔颌面外科阻生第三磨牙拔牙志愿者,年龄20～30岁。所有志愿者表现临床正常健康牙龈形态,未见组织增生,且未有服用致药物性牙龈增生相关药物史。拔牙后取牙龈组织。取适量硝苯地平粉末(南京第二制药厂提供),无水乙醇(Sigma公司,美国)溶解后用DMEM培养液稀释,使硝苯地平的终浓度分别为108、360、1200μg/L,无水乙醇的终浓度为0.01%。DMEM培养液中添加胶原合成所需的抗坏血酸(Sigma公司,美国),其终浓度为50μg/ml。1.2方法硝苯地平对牙龈成纤维细胞Ⅰ型胶原合成的影响李蓓,孙卫斌*,王娟,徐艳(南京医科大学口腔医学研究所,南京医科大学附属口腔医院口腔内科,江苏南京210029)[摘要]目的:探讨硝苯地平对人牙龈成纤维细胞Ⅰ型胶原合成的影响。方法:用含浓度为108、360、1200μg/L硝苯地平的DMEM液作用体外原代培养人牙龈成纤维细胞;酶联免疫吸附试验检测细胞Ⅰ型胶原表达水平;细胞计数观察细胞增殖。结果:Ⅰ型胶原合成检测和细胞增殖试验的结果都显示在第5天,高浓度1200μg/L、360μg/L组与低浓度108μg/L之间存在显著性差异。结论:高浓度硝苯地平有促进人牙龈成纤维细胞Ⅰ型胶原合成和细胞增殖的作用。[关键词]成纤维细胞;龈增生;Ⅰ型胶原;硝苯地平[中图分类号]R781.4[文献标识码]A[文章编号]1007-4368(2007)09-0960-04TheeffectofnifedipineontheexpressionoftypeIcollageningingivalfibroblastsLIBei,SUNWei-bin*,WANGJuan,XUYan(DepartmentofOralMedicine,DentalResearchInstitute,theAffiliatedStomatologicalHospitalofNJMU,Nanjing210029,China)[Abstract]Objective:Toinvestigatetheeffectofnifedipine,acalciumchannelblocker,ontheexpressionofcollageningingivalfibroblastsinvitro.Methods:Primarilygingivalfibroblastswereculturedandincubatedwithvariousconcentrationsofnifedipine(108、360、1200μg/L).Enzyme-linkedimmunosorbentassaywasusedtoevaluatetheamountoftypeIcollagen.Cellproliferationwasmeasuredbycellcounting.Results:Theexpressionsofcollagenandcellproliferationweresignificantlydifferentamongthehighconcentrationgroupsandtheotherson5thday,especiallyhigherin360μg/Land1200μg/Lgroup.Conclusion:NifedipinecanincreasetheexpressionoftypeⅠcollageningingivalfibroblastsandcellproliferation.[Keywords]fibroblast;gingivalhyperplasia;typeIcollagen;nifedipine[ActaUnivMedNanjing,2007,27(09):960-963][基金项目]江苏省自然科学基金资助(BJ99068)*通讯作者,E-mail:wbsun@njmu.edu.cn960-1.2.1牙龈成纤维细胞原代培养人牙成纤维细胞原代培养按司徒镇强法[1],组织块于添加100U/ml。青霉素、100μg/ml链霉素(Gibco公司,美国)的磷酸盐缓冲液中清洗3次。用组织剪将组织块剪成1mm×1mm×1mm左右大小的小块,接种于细胞培养瓶中,均匀铺开。放置好后,将培养瓶轻轻翻转,加入适量的含10%FBS(四季青生物工程材料有限公司,杭州)的DMEM培养液(Gibco公司,美国),放入CO2孵箱(Heraeus公司,德国)中。4h后翻瓶。培养20～25天,细胞从组织块中游出铺满瓶底90%左右后,0.25%胰酶(Gibco公司,美国)消化传代。至第3代时细胞用液氮冻存备用。第5代到第8代的细胞用于后续实验。1.2.2牙龈成纤维细胞鉴定形态学观察倒置显微镜下对原代培养的牙龈成纤维细胞观察。免疫组化鉴定使用抗Vimentin(博士德,武汉)和抗Cytokeratin(博士德,武汉)的S-...
