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特殊染色技术_第1页
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(一)过碘酸-希夫氏染色(PAS染色)PAS染色可以显示肾小球内的细胞增生、浸润和系膜基质等,并能很好的显示基底膜,是显示糖原和糖蛋白的基本染色。1.需要试剂2.具体染色步骤(1)切片常规脱蜡入水。(2)入1%过碘酸氧化10~15min,水洗。(3)入schiff氏液染10~30min,水洗。(4)苏木素染细胞核1~2min,水洗。(5)入1%盐酸乙醇分化数秒,水洗。(6)氨水返蓝数秒,水洗。(7)流水冲洗,镜下观察细胞核成蓝色,基底膜染成粉红色。(8)梯度乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片。3.染色结果PAS阳性物质(多糖和糖原)呈红色,核呈蓝色。4.注意事项(1)组织切片的脱蜡步骤应彻底,否则组织无法着色。(2)Schiff氏液染色的时间需严格控制。时间过长标本基底膜着色太深,时间过短标本基底膜着色淡。(3)入1%盐酸乙醇分化时间要短,时间长容易使标本褪色。(4)染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。(二)六胺银-马松染色(PAM-Masson染色)PAM-Masson染色能更清晰显示基底膜、免疫复合物和胶原纤维,免疫复合物和胶原纤维,免疫复合物的定位更为准确。1.需要试剂①1%过碘酸;②六胺银液;③苏木素染液;④氨水;⑤Masson液;⑥1%亮绿液。2.具体操作步骤(1)切片常规脱蜡入水。(2)入1%过碘酸氧化10~15min,水洗5min。(3)入六银胺液72℃染30~50分钟,以显微镜下见基底膜呈黑色即可。(4)加2%氯化金数滴于组织,5%硫代硫酸钠洗。(5)苏木素染细胞核1~2min,1%盐酸乙醇分化,氨水返蓝。(6)入Masson液约10min,1%醋酸洗。(7)入1%亮绿5~8min,1%醋酸洗。(8)梯度乙醇脱水,二甲苯透明,树胶封片。3.染色结果基底膜及系膜基质黑色,免疫复合物红色。3.注意事项(1)组织切片的脱蜡步骤应彻底,否则组织无法着色。(2)染色时间与室温和切片厚度有关,室温低、切片厚需染色时间长,反则需染色时间短。入六胺银液染色的时间需严格控制。时间过长基底膜着色过深,时间过短基底膜着色淡。(3)2%氯化金分化时间要短,时间长容易使银染褪色。(4)染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。(三)马松染色(Masson染色)Masson染色能显示各部位的免疫复合物,肾小球硬化和肾小管纤维化程度。1.需要试剂①苏木素染液;②氨水;③Masson液;④1%亮绿液。2.具体操作步骤(1)石蜡常规脱蜡入水。(2)媒染剂(10%重铬酸钾、10%三氯醋酸等量混合)染10~30min,水洗。(3)苏木素染细胞核1~2min,水洗。(4)入1%盐酸乙醇分化数秒,水洗,氨水返蓝数秒,水洗。(5)入Masson液约10min,水洗,1%醋酸洗。(6)入2.5%磷钨酸约30s,水洗,1%醋酸洗。(7)入橘黄G约2min,水洗,1%醋酸洗。(8)入1%亮绿5~8min,1%醋酸洗。(9)入100%乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片。3.染色结果细胞核红色,胶原纤维绿色,免疫复合物红色。4.注意事项(1)组织切片的脱蜡步骤应彻底,否则组织无法着色。(2)入Masson液染色时间需严格控制。时间过长着色过深,时间过短着色淡。(3)入亮绿染色时间需要严格控制,时间长容易覆盖Masson液红色。(4)染色后的组织切片要将组织四周的污染物擦掉。(四)刚果红染色在肾脏病理染色中,刚果红染色能够将dia淀粉样物质染成砖红色,是诊断淀粉样变肾病的常用染色方法之一。1.需要试剂①高锰酸钾-硫酸液;②苏木素染液;③氨水;④碱性刚果红液。2.具体染色步骤(1)切片常规脱蜡入水。(2)高锰酸钾-硫酸混合处理3min,水洗。(3)5%草酸处理3min,水洗。(4)苏木素染核2min,水洗,蓝化。(5)碱性刚果红液染10~30min。(6)入100%乙醇脱水,二甲苯透明、树胶封片。3.染色结果细胞核染蓝色,淀粉样物质呈砖红色。5.注意事项(1)组织切片的脱蜡步骤应彻底,否则组织无法着色。(2)碱性刚果红染色时间应镜下控制,染色液现配现用着色好。(3)染色后的组织切片要将组织周围的污染物痕迹擦掉。

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