(一)过碘酸-希夫氏染色(PAS染色)PAS染色可以显示肾小球内的细胞增生、浸润和系膜基质等,并能很好的显示基底膜,是显示糖原和糖蛋白的基本染色
具体染色步骤(1)切片常规脱蜡入水
(2)入1%过碘酸氧化10~15min,水洗
(3)入schiff氏液染10~30min,水洗
(4)苏木素染细胞核1~2min,水洗
(5)入1%盐酸乙醇分化数秒,水洗
(6)氨水返蓝数秒,水洗
(7)流水冲洗,镜下观察细胞核成蓝色,基底膜染成粉红色
(8)梯度乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片
染色结果PAS阳性物质(多糖和糖原)呈红色,核呈蓝色
注意事项(1)组织切片的脱蜡步骤应彻底,否则组织无法着色
(2)Schiff氏液染色的时间需严格控制
时间过长标本基底膜着色太深,时间过短标本基底膜着色淡
(3)入1%盐酸乙醇分化时间要短,时间长容易使标本褪色
(4)染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉
(二)六胺银-马松染色(PAM-Masson染色)PAM-Masson染色能更清晰显示基底膜、免疫复合物和胶原纤维,免疫复合物和胶原纤维,免疫复合物的定位更为准确
需要试剂①1%过碘酸;②六胺银液;③苏木素染液;④氨水;⑤Masson液;⑥1%亮绿液
具体操作步骤(1)切片常规脱蜡入水
(2)入1%过碘酸氧化10~15min,水洗5min
(3)入六银胺液72℃染30~50分钟,以显微镜下见基底膜呈黑色即可
(4)加2%氯化金数滴于组织,5%硫代硫酸钠洗
(5)苏木素染细胞核1~2min,1%盐酸乙醇分化,氨水返蓝
(6)入Masson液约10min,1%醋酸洗
(7)入1%亮绿5~8min,1%醋酸洗
(8)梯度乙醇脱水,二甲苯透明,树胶封片
3.染色结果基底膜及系膜基质黑色,免疫复合物红色
注意事项(1)组织切片的脱蜡步骤应彻底,否则组织无法着色